逆转HL-60/ADM细胞后超微弱发光与氧自由基水平的变化

【摘要】： 恶性肿瘤是危害人类的主要疾病。目前化疗是治疗恶性肿瘤的主要手段之一,然而化疗过程中产生的多药耐药(Multidrug resistance, MDR)却是造成化疗中断、导致治疗失败的主要因素。近年来已发现多种药物可逆转肿瘤细胞的耐药性,可如何评价其逆转效果,临床上至今仍缺乏客观的检测指标,而超微弱发光为解决这一问题提供了新的可能。生物的超微弱发光现象(Ultraweak Photon Emission,UPE)是普遍存在于有机体内的一种自发的化学发光现象。其产生与机体的氧化代谢、光合作用、细胞的分裂与死亡以及生长调节等作用密切相关。不同细胞或同种细胞的不同生理与病理状态,其发光强度都存在着明显的差别。 本实验使用环孢素A(CSA)作为逆转剂,将耐阿霉素人急性早幼粒白血病细胞系HL-60/ADM的耐药性逆转后,研究其超微弱发光强度的变化以及细胞内氧自由基水平变化的特点,从而为研究耐药机制、评价逆转效果及指导临床实践奠定基础。目的:探讨CSA对HL-60/ADM细胞的耐药逆转作用,并比较逆转前后细胞超微弱发光强度以及细胞内氧自由基水平的变化特点。 方法: 1.选择CSA作为耐药逆转剂,分别采用MTT法、流式细胞术和免疫组化法评价CSA对HL-60/ADM细胞的毒性及逆转效果; 2.用IFFM-D型流动式化学发光仪检测逆转后HL-60/ADM细胞的超微弱发光强度; 3.用化学比色法检测逆转前后HL-60/ADM细胞内MDA、SOD以及GSH含量的变化。 结果: 1. CSA的细胞毒性与逆转效果评定: ⑴当CSA浓度为0.5μg/mL以下时,即可明显抑制HL-60/ADM细胞的生长(p0.01),超过4μg/mL时抑制作用明显增强(p0.01); ⑵当CSA浓度为0.5μg/mL时即出现逆转效应,随着CSA剂量增加,逆转作用逐渐增强(p0.01);当CSA剂量达8μg/mL及以上时对细胞存活产生明显影响。 ⑶流式细胞仪:经CSA逆转后HL-60/ADM的G2期细胞显著增多,而S期细胞明显减少(P0.01);且逆转后细胞内ADM浓度明显高于逆转前(P0.01); ⑷免疫组化结果显示HL-60/ADM细胞膜上P-gp糖蛋白高表达,逆转后其表达显著下降; 2. HL-60/ADM细胞经4μg/mL CSA作用72h后,其细胞超微弱发光强度较逆转前降低(P0.01); 3.经CSA逆转后的HL-60/ADM细胞内SOD的活性显著降低(p0.01),MDA的含量则有所升高(p0.05),GSH的含量也明显降低(p0.01)。 结论: 1. CSA能有效逆转HL-60/ADM的耐药性。本实验示CSA的最佳逆转浓度为4μg/mL; 2.逆转后HL-60/ADM细胞超微弱发光强度值显著降低。其原因可能与细胞增殖速度减慢,DNA复制减少,细胞内氧化代谢减弱等因素有关; 3.逆转后HL-60/ADM细胞内氧自由基的含量升高,抗氧化剂的活性明显减低,使过多的氧自由基积聚,影响细胞的功能状态,导致细胞死亡,可能是引起细胞超微弱发光强度降低的原因之一。