收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

BMP-2和地塞米松对大鼠牙囊细胞成骨作用的研究

徐璐璐  
【摘要】: 目前,牙周疾病引起的牙周组织缺损的治疗主要包括引导组织再生以及应用组织工程方法通过修复获得牙周新附着,恢复天然牙周组织的解剖结构和支持组织。 组织工程的基本方法是将体外培养扩增的正常组织细胞种植于天然的或人工合成的、具有良好的生物相容性和生物降解性的细胞外基质材料上,经过一段时间的培养,将这种细胞生物材料复合体植入机体,以形成新的具有其原来特殊功能和形态的相应组织和器官,达到修复创伤和重建功能的目的。有研究报道[1],以牙周膜细胞为种子细胞,利用组织工程方法成功修复牙周组织。 研究表明体外培养的牙囊细胞在一定的诱导条件作用下可以向成骨/成牙骨质细胞的表型分化[2]。那么以牙囊细胞为种子细胞是否可以修复牙周组织缺损呢?联合应用BMP-2和地塞米松是否能促进牙囊细胞体内成骨作用呢?目前尚无报道。 本实验首先观察了BMP-2、地塞米松以及二者联合作用对大鼠牙囊细胞体外增殖和分化能力的影响。将不同诱导条件下的牙囊细胞与β-磷酸三钙进行体外复合,观察了细胞在支架材料表面的增殖与贴附情况,并将其植入免疫缺陷小鼠体内,观察BMP-2和地塞米松联合作用是否能够增强牙囊细胞在体内向成骨/成牙骨质细胞的分化能力。本研究的内容如下: 第一部分:大鼠牙囊细胞的体外培养及其鉴定 目的:体外培养大鼠牙囊细胞(RDFCs),鉴定其细胞来源及表型,为牙周组织再生的研究提供可靠的种子细胞来源。方法:选择出生后6-7d SD仔鼠,分离上、下颌第一、第二磨牙牙胚,取牙囊组织进行原代和传代培养。通过倒置显微镜观察细胞形态及生长情况;波形丝蛋白(Vimentin,VIM)和角蛋白(Cytokeratin,CK)鉴定其细胞来源;免疫组化染色技术检测细胞牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、I型胶原(type I collagen,CoL-I)、III型胶原(typeIII collagen,CoL-III)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达。结果:细胞形态呈多形性,有长梭形,纺锤形、不规则三角形等,波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。免疫组化染色显示DMP1阴性表达,OPN、BSP、CoL-I、CoL-III、FN在胞浆中呈不同程度的阳性表达。结论:大鼠牙囊细胞来源于外胚间充质,具有成纤维细胞的形态特征及成骨/成牙骨质细胞表型特征,可将牙囊细胞作为种子细胞用于牙周组织工程的再生研究。 第二部分:BMP-2和地塞米松对体外培养大鼠牙囊细胞生物学特性的影响 目的:观察BMP-2、地塞米松、BMP-2/地塞米松联合作用对体外培养大鼠牙囊细胞增殖、分化的影响。方法:取生长状态良好的第3代大鼠牙囊细胞,血清饥饿同步化后,分别加入含BMP-2(100ng/ml)、地塞米松Dex (10-8mol/ml)、BMP-2(100ng/ml)+地塞米松(10-8mol/ml)的DMEM培养液,诱导1d、3d、5d后,利用四唑盐比色法(MTT)检测不同诱导条件下对大鼠牙囊细胞增殖影响。通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒、钙化结节染色、RT-PCR检测DMP-1、DSPP、BSP、OCN、Col I基因表达的方法,分别检测不同诱导条件下对大鼠牙囊细胞分化的影响。结果:BMP-2、地塞米松分别诱导均能促进牙囊细胞的增殖,诱导3天后BMP-2作用最为显著,地塞米松则在第1天时促增殖作用最强,其后逐渐降低,然而BMP-2/地塞米松联合作用在各个时间点均能显著促进牙囊细胞的增殖。此外,地塞米松对牙囊细胞的促分化作用强于BMP-2,当两者联合作用时促分化能力最强。结论: BMP-2、地塞米松均能促进牙囊细胞增殖与分化,然而两者联合作用促增殖和分化的能力最为显著,提示其在牙周组织工程中的应用前景。 第三部分:BMP-2和地塞米松作用的大鼠牙囊细胞复合β-磷酸三钙生物陶瓷的实验研究 目的:以BMP-2和地塞米松诱导的大鼠牙囊细胞作为种子细胞,β-磷酸三钙作为细胞支架材料,体外构建细胞生物材料复合体,观察大鼠牙囊细胞在β-磷酸三钙生物陶瓷材料的贴附、增殖情况。方法:收集培养的第3代RDFCs,血清饥饿同步化后,细胞分为四组,分别为BMP-2、Dex、BMP-2+Dex诱导组及空白对照组。诱导3d后,将密度为4×106/ml的细胞悬液0.1ml均匀接种到预制好的β-TCP支架材料上,分别于体外培养3d、7d取细胞材料复合体,通过细胞计数,扫描电子显微镜观察细胞在材料表面的贴附、增殖情况。结果:细胞计数发现,7d时BMP-2+Dex诱导组细胞数量显著高于BMP-2诱导组、Dex诱导组(p0.01)。扫描电镜观察,β-TCP表面呈多孔三维立体网状结构。细胞接种3 d和7d时,单位面积内BMP-2+Dex诱导组细胞数量均明显高于BMP-2诱导组、Dex诱导组、对照组。结论:β-磷酸三钙具有良好的生物相容性,利于大鼠牙囊细胞的贴附和生长,证明了BMP-2和地塞米松联合作用促进大鼠牙囊细胞的增殖、分化的协同效应,为进一步使用BMP-2和地塞米松诱导大鼠牙囊细胞,并与β-磷酸三钙生物陶瓷复合后体内移植实验提供依据。 第四部分:BMP-2和地塞米松诱导后大鼠牙囊细胞/β-磷酸三钙生物陶瓷复合体在免疫缺陷鼠体内成骨作用的研究 目的:观察BMP-2、地塞米松、BMP-2+地塞米松对大鼠牙囊细胞在体内分化能力的影响。方法:将经BMP-2、Dex、BMP-2+Dex诱导后的牙囊细胞与β-TCP生物陶瓷支架材料复合后,移植入免疫缺陷小鼠体内8周,取移植物进行HE染色及Masson染色观察。结果:HE及Masson染色结果均表明,BMP-2/Dex联合诱导组移植物可见骨组织及类骨质形成,并可见血管长入。BMP-2诱导组也可见少量成骨组织。而Dex诱导组、未诱导组及空白对照组均未见骨组织及类骨质形成,但在材料孔隙周围可见细胞及细胞外基质成分。结论:BMP-2/地塞米松协同诱导的大鼠牙囊细胞与β-TCP生物陶瓷复合后,在体内能分化成为成骨/成牙骨质细胞样细胞,并形成骨样组织。为牙囊细胞/生物材料复合体修复牙周组织缺损提供理论依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 侯卫坪,郭希民;组织工程在泌尿外科重建中的研究进展[J];国外医学.泌尿系统分册;2002年04期
2 ;关于举办《组织工程在口腔医学中的应用》研讨班的通知(第一轮)[J];口腔医学研究;2002年03期
3 宋强,史嘉玮,董念国,孙宗全;组织工程心脏瓣膜研究进展[J];中华实验外科杂志;2003年04期
4 姚德鸿;男科学组织工程研究前景[J];中华男科学;2003年05期
5 张蕾,刘肖珩,陈槐卿;韧带组织工程研究进展[J];生物医学工程学杂志;2004年04期
6 胡冰,刘怡,王松灵;从细胞到器官——牙组织工程任重而道远[J];上海口腔医学;2005年02期
7 杨嗣星;申复进;王玲珑;;组织工程化尿道研究现状与前景[J];中华泌尿外科杂志;2006年12期
8 ;第二届全国组织工程、干细胞与神经再生学术会议在南通召开[J];南通大学学报(医学版);2007年01期
9 Cebotari S.;Lichtenberg A.;Tudorache I.;徐永城;;自体祖细胞组织工程人类心脏瓣膜的临床应用[J];世界核心医学期刊文摘(心脏病学分册);2007年01期
10 王莉莎;;我眼中的组织工程[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年35期
11 ;CRTER杂志近期重点组稿内容[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年41期
12 ;关于举办“神经干细胞和组织工程专题研讨会”的通知[J];神经解剖学杂志;2009年02期
13 ;CRTER杂志近期重点组稿内容[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年13期
14 ;SCI收录的组织工程类期刊介绍[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年20期
15 ;中国神经组织工程研究领域——著名专家介绍[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期
16 王勤,李保陆;聚乳酸在组织工程学方面的应用研究[J];生物医学工程学杂志;1999年S1期
17 黄伟春!300192天津,张其清!300192天津;骨和软骨组织工程进展[J];中华整形外科杂志;2000年04期
18 张其清,张立海,马东瑞,袁歆,刘玲蓉;组织工程及其支架研究进展和面临的问题及展望[J];基础医学与临床;2001年06期
19 陈滨,裴国献;组织工程学的临床应用要求[J];现代康复;2001年12期
20 王石泉,朱爱萍,胡勤刚,沈健;组织工程血管构建的研究进展[J];中国修复重建外科杂志;2001年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈馨;邱凯;刘建伟;万昌秀;;组织工程用三维基质水凝胶的初步研究[A];第九届全国生物材料学术会议(CBMS-9)论文集[C];2002年
2 张西正;;生物力学在组织工程中的应用[A];第九届全国生物力学学术会议论文汇编[C];2009年
3 白晓峰;田卫东;陈希哲;;组织工程血管化的相关研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
4 李雪盛;孙建军;姜伟;刘肖;;组织工程化缓释BMP-2听骨赝复物听泡植入对豚鼠耳蜗功能的影响[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年
5 周呈文;王常勇;Descamps Michel;卢建熙;;磷酸钙多孔生物陶瓷作为组织工程支架的应用研究[A];第九届全国生物材料学术会议(CBMS-9)论文集[C];2002年
6 魏清荣;万昌秀;刘建伟;赵强;;组织工程用牛心包材料体外降解规律初步研究[A];第九届全国生物材料学术会议(CBMS-9)论文集[C];2002年
7 杨德业;张怀勤;季亢挺;黄晓燕;徐力辛;;内皮祖细胞在制备组织工程血管中的角色[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
8 古松钢;许建衡;;干细胞与组织工程研究的新进展[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
9 孙庆兰;张西正;张华;李瑞欣;郭勇;张燕;;组织工程血管支架材料的研究进展(综述)[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
10 蔡绍皙;卢晓;王远亮;王红兵;潘君;叶志义;黄岂平;秦建;吴泽志;;组织工程的一组基础实验研究:细胞与支撑介质间的相互作用[A];“力学2000”学术大会论文集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周晓东;胎盘基质干细胞骨向分化及生物反应器构建骨组织的修复效果[D];第四军医大学;2005年
2 孙晓红;种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究[D];中国医科大学;2005年
3 戚孟春;BMP-7基因修饰的自体骨髓间充质干细胞促进大鼠下颌牵张成骨的实验研究[D];四川大学;2005年
4 郑毅雄;人骨膜间质祖细胞作为组织工程种子细胞的分子特征研究[D];浙江大学;2006年
5 唐月军;纳米增韧(HA-ZrO_2系)生物复合多孔陶瓷的制备及其颌骨缺损修复实验研究[D];第二军医大学;2006年
6 高峰;组织工程补片修补犬腹主动脉的实验研究[D];中国协和医科大学;2003年
7 符彦基;骨形成蛋白-7基因修饰的骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤修复作用的实验研究[D];南昌大学;2008年
8 吴志伟;人胚雪旺细胞组织工程神经的构建[D];复旦大学;2004年
9 顾春虎;去细胞猪主动脉瓣构建组织工程心脏瓣膜的初步实验研究[D];第四军医大学;2005年
10 张微波;牙髓干细胞体外分化能力的研究[D];武汉大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 常秀梅;组织工程方法构建牙周组织的实验研究[D];第一军医大学;2005年
2 叶国;大鼠牙囊细胞体外培养方法的改良及生物学特性的初步研究[D];四川大学;2007年
3 常庆;AdLacZ基因修饰的山羊耳软骨细胞复合F127构建组织工程化软骨的实验研究[D];苏州大学;2007年
4 陈伟豪;丝素蛋白膜修复犬尿道缺损的实验研究[D];南方医科大学;2008年
5 李娜;组织工程中应变对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
6 刘超;人骨髓干细胞成牙潜能的初步研究[D];福建师范大学;2005年
7 刘伟鹏;骨髓间充质干细胞复合PLGA支架修复组织损伤的实验研究[D];江西医学院;2005年
8 张兆清;复合骨髓间充质干细胞的组织工程皮肤修复皮肤缺损[D];第四军医大学;2006年
9 李军杰;胶原海绵为支架体外构建工程化心肌组织的实验研究[D];第四军医大学;2007年
10 殷迪;人羊膜上皮细胞与肌基膜管支架相容性的实验研究[D];吉林大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 汪敏华;组织工程:再造器官可能圆梦[N];解放日报;2001年
2 丁香;成人干细胞的突破——首次组织工程气管移植成功[N];中国医药报;2008年
3 沈英甲;组织工程:新的医学奇迹[N];中国中医药报;2001年
4 记者  邱曙东;上海正开展兔子膀胱修复实验[N];解放日报;2006年
5 记者 张建松;上海梦想“掏心换肝”[N];新华每日电讯;2001年
6 本报记者 王春 特约通讯员 李佳;探访组织工程“梦工厂”[N];科技日报;2005年
7 记者 张建国;首届生物材料与组织工程产品质量控制国际研讨会举行[N];中国医药报;2009年
8 记者 毛黎;美找到获得组织工程血管新途径[N];科技日报;2007年
9 本报记者 吴洁;为实现“人体配件工厂”的梦想[N];科技日报;2002年
10 本报记者 唐闻佳;“一只假耳朵,骗取三个亿”?[N];文汇报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978