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~(131)I-RC-160及5-FC对共表达CD-IRES-hSSTR2肿瘤细胞的协同杀伤作用的实验研究

袁梦晖  
【摘要】: 目的建立稳定共表达人生长抑素受体2亚型(SSTR2)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)的非小细胞型肺腺癌A549细胞系,并建立荷瘤裸鼠模型,通过99Tcm-RC-160进行hSSTR2介导的报告基因放射性核素受体显像,观察其显像特征;通过131I-RC-160联合5-FC进行荷瘤裸鼠肿瘤的实验性治疗并观察其治疗效果。 方法应用反转录PCR方法从人胚肾293细胞中克隆人SSTR2基因,通过基因重叠延伸拼接(SOE)结合PCR方法将CD、内部核糖体进入位点(IRES2)和SSTR2连接,并构建表达载体。体外转染人非小细胞型肺腺癌A549细胞并筛选,通过间接免疫荧光、RT-PCR、Western Blot及流式细胞仪技术检测SSTR2的表达,建立稳定表达的pCIS-A549细胞株,将其植入BALB/C雄性裸鼠建立荷瘤裸鼠模型;用酒石酸亚锡作还原剂,用99Tcm直接标记RC-160,进行hSSTR2介导荷瘤裸鼠的报告基因显像,并设立接种未转染CD-IRES-hSSTR2 A549肿瘤的裸鼠为对照组,于30 min、1h、2h、4h、8h、12h、24h等不同时间点观察其显像特征。采用NBS法进行131I标记RC-160,观察131I-RC-160加5-FC、131I-RC-160、5-FC、Na131I对移植瘤的抑制作用,等量的生理盐水作药物的空白对照,治疗结束后,计算抑瘤率,随后处死裸鼠取肿瘤组织作HE染色和免疫组化染色观察移植瘤的病理组织学变化。 结果1.成功克隆了人SSTR2基因,并构建了CD和SSTR2基因的双顺反子表达载体,进一步建立了稳定转染上述表达载体的pCIS-A549细胞株,间接免疫荧光、RT-PCR、Western Blot及流式细胞仪技术检测证实了SSTR2的表达;2.99Tcm-RC-160经尾静脉注射后,30min就可见肿瘤部位显像,4-8h肿瘤显影呈放射性高度浓集影,12h持续显影,而对照组肿瘤始终未见显影。3.治疗结果统计中,把对pCIS-A549移植瘤治疗的几个组与生理盐水组比较,131I-RC-160加5-FC联合治疗组、5-FC治疗组和131I-RC-160治疗组的移植瘤生长明显受抑,其抑瘤率分别为(82.75±4.2)%、(70.69±2.9)%和(66.36±3.7)%;HE染色显示:联合治疗组的肿瘤组织大部分片状坏死,坏死区域达80%左右, 131I治疗组瘤体组织也可见部分点片状坏死;免疫组化染色显示联合治疗组呈现大片坏死区域,5-FC治疗组和131I-RC-160治疗组亦呈现小片状坏死区域,131I治疗组坏死区域较小,而生理盐水治疗组则未见明显坏死区域。在各组比较中可以看出,联合治疗组的抑瘤作用明显强于其它各单种药物治疗组。Na131I组对转染或未转染的移植瘤的抑制效应比较差异无统计学差异。 结论本研究建立的人非小细胞型肺腺癌细胞系(pCIS-A549)可以共表达人SSTR2和大肠杆菌CD“自杀”基因,99Tcm-RC-160可用于荷pCIS-A549肿瘤裸鼠的报告基因显像,131I-RC-160协同5-FC治疗荷pCIS肿瘤的抑瘤效果优于单独应用131I-RC-160或5-FC。利用CD-IRES-hSSTR2,协同“自杀基因/前体药物”及放射性核素标记SSA,为实现非小细胞肺癌及不表达SSTR受体的其他肿瘤的受体显像及受体介导治疗提供了新的可能的途径。


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