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汉坦病毒感染体外培养的乳鼠大脑皮层神经元诱导凋亡发生的初步研究

崔继红  
【摘要】: 汉坦病毒(HTV)属于布尼亚病毒科汉坦病毒属,是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒肺综合征(HPS)的致病病毒。HTV是一种泛嗜性病毒,病毒抗原在体内多种器官和多种类型细胞中分布。脑组织也是HFRS病毒感染的重要靶器官之一。我们以往的研究证实HTV感染乳鼠脑神经细胞中NP抗原免疫组化染色阳性,定位于胞浆内,分布于皮层、海马回、小脑蒲肯野细胞层等部位。 本实验在建立乳小鼠、乳大鼠大脑皮层神经元体外培养体系的基础上,在体外对HTV在脑皮层神经元中的感染以及病毒感染对神经元的致病性进行初步研究。实验中采用出生后24 hr之内的乳大鼠、乳小鼠,做神经元的原代培养,分别感染HTNV 76-118株和SEOV L99株病毒,分别于感染后1、2、3、4、5、6、7d收集细胞,进行免疫细胞化学染色、RT-PCR、Real-time PCR、Western blot检测,观察到HTV对神经元易感,在神经元内成功复制、增殖。同时为了证实我们观察到的感染后神经元出现的CPE是否为凋亡我们又进行了一系列凋亡检测,Hoechst染色、TUNEL和细胞凋亡ELISA检测证实病毒感染确实诱导了凋亡发生,而后的凋亡相关基因检测和Mitotracker○RRed CMXRos染色显示,随着病毒感染时间的延长抗凋亡蛋白Bcl-2逐渐减少,而促凋亡基因Bax、p53、CytC、caspase逐渐增加,达到高峰才下降,提示HTV感染可能诱导了p53介导的线粒体凋亡途径。本实验在乳大、小鼠大脑皮层神经元体外培养的体系基础上,证实了神经元对汉坦病毒易感,而且HTV感染可以诱导神经元凋亡,这种凋亡有可能是p53介导的线粒体凋亡。其中两种病毒感染存在着差异是由于种属差异而引起的。本研究为进一步研究HTV神经元致病性的提供依据,对揭示HFRS神经系统并发症的发病机制提供了有力证据,为预防和治疗神经并发症提供基础。


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