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乙肝肝硬化患者PBMC TLR2/4的表达及T细胞亚群的研究

王孝勤  
【摘要】: 目的:通过对乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)表面Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、TLR4表达的检测,以及TLR2、TLR4与CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells, Treg)、CD3+、CD4+、CD8+ T细胞相关性的研究,探讨TLR2、TLR4在乙型肝炎肝硬化发病中的作用及对乙肝肝硬化患者适应性免疫的影响。 方法:采用三色荧光染色法,用CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP TriTEST三色试剂分析乙肝肝硬化患者CD3/CD4/CD8相关各T细胞亚群绝对值。分别应用抗-TLR2-PE、抗-TLR4-APC、抗-CD14-FITC及抗-CD4-PerCP、抗-CD25-FITC、抗-CD127-PE对68例研究对象[乙型肝炎肝硬化患者(HBV related liver cirrhosis, LC)30例、慢性乙型肝炎患者(chronic hepatitisB, CHB)21例、健康对照(normal control, NC)16例外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)表面分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪分别对TLR2、TLR4及Treg进行检测。组间比较采用Kruskal-Wallis秩和检验,相关性分析采用Spearman秩相关。 结果:LC组、CHB组、NC组外周血单核细胞表面TLR2、TLR4的平均荧光强度(MFI)分别为TLR2 183.3(87.4~540.5)、206.8(82.4~368.3)和93.1(66.9~129.5);TLR4 34.2(15.8~43.2)、23.4(11.8~45.2)和18.5(9.9~22.7)。LC组与NC组、CHB组与NC组TLR2 MFI比较均明显升高(P0.05),LC组TLR2与CHB组比较无明显差异(P0.05)。LC组与NC组、CHB组与NC组、LC与CHB组TLR4 MFI比较均明显升高,差异有统计学意义( P 0.05 )。LC组、CHB组、NC组CD4+CD25+CD127low/-Treg占CD4+T淋巴细胞的比例分别为:5.1%(2.7~8.2)%、5.7%(4.0~8.6)%、4.6%(2.9~7.4)%,LC组与NC组比较无明显差异(P0.05),CHB组与NC组、CHB组与LC组比较差异有统计学意义(P0.05)。在所有三组中,TLR2与TLR4表达呈显著正相关性(r=0.272,P=0.026),在LC组中,TLR4与Treg呈正相关(r=0.469,P=0.032),Treg与年龄呈负相关(r=-0.383,P=0.045)。LC组PBMC TLR2与CD3+ T细胞计数呈负相关(r=-0.673,P=0.001),TLR2与CD4+ T细胞计数呈负相关(r=-0.893,P=0.007),TLR2与CD8+ T细胞计数呈负相关(r=-0.538,P=0.012),TLR2与HBV DNA对数值呈负相关(r=-0.569,P=0.007),HBsAg阳性LC组与HBsAg阴性LC组之间相比,Treg、TLR2、TLR4均无显著差异(P均0.05)。 结论:TLR2、TLR4可能参与了乙型肝炎肝硬化的发病,并与乙肝肝硬化患者免疫失衡有关。


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