收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

MTA调控人牙髓干细胞分化的分子机制的研究

赵秀  
【摘要】: 活髓保存治疗(包括盖髓术和切髓术)主要用于牙髓可复性损伤,是保证患牙健康的基础,其目的是维持牙髓-牙本质复合体的活力与功能,要使活髓保存治疗取得满意疗效,需要有良好的盖髓材料以便将牙髓与感染组织隔离,并为牙髓组织的自身修复提供良好的生物学环境。MTA作为盖髓剂可以有效隔绝外界刺激、保护牙髓,为牙髓修复提供适宜微环境,在诱导牙髓细胞的分化和预防感染、促进牙本质桥形成方面发挥重要作用。人牙髓干细胞(Human Dental Plup Stem Cells,hDPSCs)是存在于牙髓组织中未分化间充质细胞,具有多向分化潜能,可形成功能性的成牙本质细胞和牙本质。近年来MAPKs信号途径在细胞增殖和分化研究领域备受关注,作为一种进化保守性细胞间相互作用机制,MAPKs信号途径对多种细胞的增殖、分化和凋亡过程都有影响。 本课题在对人牙髓干细胞进行体外分离、培养和鉴定的基础上,应用MTT、Real-time PCR和Western blot等技术,研究MTA作用于人牙髓干细胞后,对细胞存活、增殖与分化的影响,进一步研究其对MAPKs各通路总蛋白和磷酸化蛋白的影响;并应用MAPKs抑制剂和MTA联合作用,特异性阻断各MAPKs通路,观察对MTA诱导人牙髓干细胞分化的影响。通过实验明确各MAPKs通路在MTA促进人牙髓干细胞中分化标记基因表达增高中的具体调节作用,为进一步研究牙髓损伤修复过程中MTA促进人牙髓干细胞分化过程中的分子机制提供理论基础。 本研究共分为三个部分: 第一部分:MTA对人牙髓干细胞增殖和分化的影响 目的体外培养hDPSCs,观察MTA对体外培养的hDPSCs的存活、增殖和分化的影响。 材料和方法取正常19-25岁成人第三磨牙牙髓,体外分离克隆培养hDPSCs并鉴定;不同浓度MTA作用于hDPSCs不同时间后,通过MTT和Real-time PCR技术检测MTA对hDPSC存活和增殖的影响,以及ALP、DSPP、BSP、OCN和COLImRNA表达的变化。 结果通过倒置显微镜下细胞形态学检查,以及免疫组织化学染色证明所培养细胞是hDPSCs;高浓度MTA(20mg/ml和10mg/ml)明显减低细胞的存活率,低浓度MTA (2mg/ml及以下)对细胞无毒性,促进hDPSCs的增殖,并且能引起ALP、DSPP、BSP、OCN和COLI基因的mRNA表达增高。 结论成功分离和培养了hDPSCs,MTA能够促进hDPSCs的增殖和分化。 第二部分:MTA对人牙髓干细胞中MAPKs信号通路蛋白表达的影响 目的观察MTA单独作用及与MAPKs抑制剂联合作用hDPSCs后,细胞中MAPKs各条通路蛋白表达的影响。 材料和方法将hDPSCs随机分为空白对照组和MTA作用不同时间组,利用Western blot方法检测MTA作用后,hDPSCs中ERK1/2、JNK1/2和p38总蛋白和活性蛋白(磷酸化蛋白)的表达;再将hDPSCs随机分为空白对照组、MTA阳性对照组和MTA与MAPKs抑制剂共同作用组,Western blot检测MTA和MAPKs通路抑制剂联合应用后,hDPSCs中三条通路总蛋白和磷酸化蛋白的表达。 结果在MTA作用下,加抑制剂前后,与对照组比较,2h内hDPSCs中各MAPKs通路总蛋白没有明显变化;而各磷酸化蛋白则发生了明显变化。在加抑制剂前,MTA作用15min后phos-ERK、phos-JNK、phos-p38表达明显增高;而加入抑制剂后,各通路特异性抑制剂ERK(U0126)、p38(SB203580)、JNK(SP600125)明显降低了本通路磷酸化蛋白的表达。各组与对照组比较差异有统计学意义。 结论MTA不能引起MAPKs通路总蛋白的变化,却能明显促进磷酸化蛋白的增高;MAPKs抑制剂能够特异性抑制本通路MTA作用后磷酸化蛋白的表达。 第三部分:MAPKMAPKs通路在MTA诱导人牙髓干细胞分化过程中的作用 目的应用MAPKs阻滞剂与MTA共同作用hDPSCs后,观察ALP、DSPP、BSP、OCN和COLI的变化,明确各条通路在hDPSCs表达分化相关基因中的作用。 材料和方法将hDPSCs随机分为空白对照组、阳性对照组和实验组,各通路抑制剂作用1h后,加入MTA作用12h,采用Real-time PCR法检测ALP、DSPP、BSP、OCN和COLImRNA的变化。 结果与阳性对照组相比,加入U0126后,各基因的表达明显下降,差异具有统计学意义;而加入SB203580和SP600125后,各基因的mRNA表达无明显变化,差异无统计学意义。 结论在MTA促进hDPSCs分化标记基因表达增高中,ERK通路起主要作用,而JNK和p38通路可能没有参与此过程。 总之,本研究发现MTA可促进hDPSCs的增殖和分化,并且能够激活MAPKs通路,使hDPSCs中MAPKs磷酸化蛋白表达增高,其中ERK MAPK途径可能参与了MTA促使hDPSCs向成牙本质样细胞的分化。这一研究成果,为揭示MTA促进hDPSCs向成牙本质样细胞分化的分子机理以及探索新的牙髓炎症治疗方法提供了实验依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 郭红延,吴补领,郭希民,王常勇;大鼠牙髓干细胞的培养和鉴定[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2004年05期
2 陆群,吴补领,周学东,林媛,王冀姝,韩骅;小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化[J];第四军医大学学报;2003年18期
3 刘少华,魏奉才,孙善珍,张春艳,刘云生;牙髓培养细胞特性与牙髓干细胞定位[J];上海口腔医学;2004年02期
4 潘爽;凌均棨;;Leptin受体在人牙髓干细胞中表达的实验研究[J];实用口腔医学杂志;2008年05期
5 侯延华;谭颖徽;姚韶武;何飞;张纲;王建华;;人牙髓干细胞体外二维和三维培养的实验研究[J];第三军医大学学报;2006年09期
6 张兆强;郑日成;张清彬;;牙髓干细胞研究进展[J];中国美容医学;2011年02期
7 卿海;干细胞技术及其在口腔医学中的研究及应用前景[J];生物医学工程学杂志;2002年04期
8 杨雪超;牙髓中的干细胞[J];国外医学.口腔医学分册;2002年06期
9 李昊妍,梁景平,吴安平,张旭,宋爱梅,王晓春;Cbfa1/Runt2在牙髓组织和牙髓干细胞中的表达研究[J];临床口腔医学杂志;2005年08期
10 韦曦;凌均棨;;牙髓干细胞与牙本质再生相关性的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2006年03期
11 李昊妍;人牙髓细胞的体外培养[J];国外医学.口腔医学分册;2004年02期
12 刘路;凌均棨;;牙髓干细胞及其在组织工程中的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2008年04期
13 荣靖;周向荣;刘秋英;王一飞;;牙髓干细胞的研究进展[J];生命科学;2010年10期
14 侯延华;谭颖徽;;牙髓干细胞研究进展[J];重庆医学;2006年20期
15 王瑛慧;王万永;贾智;;APA微囊包裹的牙髓干细胞成牙本质作用的研究[J];天津医科大学学报;2006年04期
16 周岚;郑根建;罗军;林肖南;应于康;吴伟力;;N-乙基-N-亚硝基脲对兔牙髓干细胞侵袭和黏附能力诱变的体外研究[J];实用医学杂志;2007年09期
17 姜明;金岩;郝伟;唐亮;张勇杰;李园;;大鼠牙髓干细胞与牙乳头间充质细胞成牙能力的比较研究[J];实用口腔医学杂志;2007年03期
18 贺慧霞;金岩;史俊南;罗玉庆;周艳妮;彭智;许玉和;;牙髓干细胞向神经细胞方向的诱导分化实验[J];华西口腔医学杂志;2007年04期
19 张映娟;陈文霞;;牙髓干细胞的可塑性研究[J];国际口腔医学杂志;2009年05期
20 张萍;朱聪惠;张纲;裘松波;谭颖徽;;牙髓干细胞及其应用前景的研究进展[J];西部医学;2011年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈博;余擎;;人血小板裂解液在成人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
2 贾谦;吴家媛;倪龙兴;;碱性成纤维细胞生长因子对牙髓干细胞成骨分化的影响[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
3 吕长胜;翟旭;;大鼠牙髓干细胞分化成骨样细胞能力研究[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
4 吕长胜;翟旭;;大鼠牙髓干细胞分化成骨样细胞能力研究[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
5 陆家瑜;华丽;邹德荣;;乳牙牙髓干细胞体内外诱导成骨的研究[A];中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第一次学术年会会议论文集[C];2009年
6 麻丹丹;高杰;吴补领;;改良组织块酶消化法培养人龋坏牙髓干细胞的实验研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
7 申元源;陈柯;许诺;;人乳牙牙髓干细胞体外诱导向软骨细胞分化的实验研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
8 李昊妍;梁景平;张秀丽;殷德民;;人牙髓干细胞与β-TCP复合后的体内外实验研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
9 王晓东;王捍国;倪龙兴;;NTs在人牙髓干细胞中的表达及其对细胞增殖分化的影响[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
10 李昊妍;梁景平;张秀丽;殷德民;;人牙髓干细胞与β-TCP复合后的体内外实验研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陆群;牙髓干细胞分离培养鉴定和体外诱导分化的研究[D];第四军医大学;2002年
2 赵秀;MTA调控人牙髓干细胞分化的分子机制的研究[D];第四军医大学;2010年
3 张红梅;微环境对牙髓干细胞成牙能力的影响及MAPK信号分子机制调控的研究[D];第四军医大学;2010年
4 麻丹丹;人深龋牙髓干细胞矿化相关蛋白质组学分析及候选基因Stathmin功能的初步研究[D];南方医科大学;2012年
5 王亦菁;牙髓干细胞与外胚间充质干细胞表型和分化能力的比较研究[D];第四军医大学;2005年
6 黄怡;大鼠牙髓干细胞在微弧氧化钛表面诱导分化成骨的研究[D];华中科技大学;2012年
7 张微波;牙髓干细胞体外分化能力的研究[D];武汉大学;2005年
8 贺慧霞;牙髓干细胞分离鉴定及其制备组织工程化牙本质牙髓复合体的实验研究[D];第四军医大学;2005年
9 于金华;牙髓干细胞形成牙体组织能力及其制备嵌合体牙齿的实验研究[D];第四军医大学;2007年
10 汪银雄;用牙髓干细胞构建牙齿样结构的实验研究[D];第四军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 荆晓艳;维生素C诱导人脱落乳牙牙髓干细胞膜片形成及体外成骨实验初步研究[D];天津医科大学;2012年
2 翟旭;大鼠牙髓干细胞与骨髓间充质干细胞分化成骨样细胞能力对比研究[D];北京协和医学院;2011年
3 丁伯福;锁骨颅骨发育不良综合征患者骨髓间充质干细胞及牙髓干细胞生物学行为研究[D];南京医科大学;2011年
4 周惠;釉质基质蛋白对乳牙牙髓干细胞体外增殖、分化能力影响的研究[D];吉林大学;2014年
5 贾谦;碱性成纤维细胞因子对牙髓干细胞矿化能力影响及机制研究[D];第四军医大学;2012年
6 张晓;IL-8及其受体在人牙髓干细胞的表达及其调控的初步研究[D];第四军医大学;2013年
7 刘明月;不同浓度β-glycerophosphate对牙髓干细胞分化的影响[D];哈尔滨医科大学;2012年
8 王志华;LPS对人牙髓干细胞增殖定向分化能力的影响及其相关机制的研究[D];第四军医大学;2013年
9 刘南霞;富血小板纤维蛋白对牙髓组织再生性影响的研究[D];第四军医大学;2013年
10 张晓莉;TGF-β_3和牙髓干细胞修复损伤面神经效果的检测[D];新疆医科大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 记者 张忠霞;用猴子牙髓干细胞能刺激脑细胞生长[N];新华每日电讯;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978