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骨髓间充质干细胞分化为成牙本质细胞的体内研究

段晴月  
【摘要】: 干细胞分化为成牙本质细胞是牙本质缺损修复的关键环节。骨髓间充质干细胞是一类成体干细胞,在干细胞龛的调控下能够定向分化为多种中胚层和神经外胚层来源的组织细胞,但是对于这种非牙源性的干细胞能否通过分化为成牙本质细胞的方式修复牙本质缺损的研究鲜有报道。本实验采用绿色荧光蛋白转基因小鼠的骨髓间充质干细胞的体内实验观察BMMSCs能否分化为成牙本质细胞并参与牙本质损伤的修复,为牙齿组织工程提供更具活力的种子细胞。 方法:(1)取绿色荧光蛋白转基因小鼠的全骨髓,贴壁法体外培养绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定细胞表面分子标记物,体外成骨成脂诱导;(2)尾静脉注射构建绿色荧光骨髓间充质干细胞嵌合普通C57BL/6小鼠模型;(3)制备嵌合小鼠牙本质缺损修复模型,用免疫荧光检测法观察绿色荧光骨髓间充质干细胞是否参与牙本质缺损的修复,探讨骨髓间充质干细胞作为修复牙本质缺损种子细胞的可行性。 结果:(1)培养的绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞具有很强的增殖能力并可持续传代,P3代细胞流式细胞术检测干细胞表面分子阳性,绿色荧光表达稳定,具有体外分化成骨成脂能力;(2)构造的嵌合小鼠模型全骨髓再培养,发现大量具有绿色荧光标记的细胞存在,各组织脏器也有不同数量的绿色荧光细胞存在。(3)免疫组织荧光显示牙本质缺损模型嵌合小鼠牙髓腔内出现大量自发绿色荧光的细胞,牙本质缺损处的部分绿色荧光细胞表达牙本质特异性蛋白DSP和DMP-1。 结论:本实验利用示踪能力强的绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞构建荧光嵌合小鼠模型,验证骨髓间充质干细胞体内向成牙本质细胞方向分化的能力,发现骨髓间充质干细胞在体内微环境的诱导下可以向成牙本质细胞方向分化,并参与牙本质缺损的修复,可以作为牙齿组织工程的干细胞源。


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