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交感神经源性组胺对兔耳血管舒缩功能的影响

陈瑛瑛  
【摘要】: 我们前期发现,组胺在小鼠、豚鼠、犬、猴等多种动物的交感神经系统内广泛分布;刺激交感神经末梢能够使组胺(HA)和去甲肾上腺素(NE)共同从交感神经释放。这些结果强烈提示,组胺可能是一种与NE共存的交感神经递质。 机体的大部分血管主要受交感神经支配,既然组胺在交感神经内存在并能从其神经末梢释放,交感组胺在血管上是否可以介导一定的突触前及突触后效应呢?为了回答这一问题,本实验采用离体兔耳恒压灌流模型,观察不同的组胺受体拮抗剂对电刺激引起的血管收缩的影响;并建立了优化的高效液相色谱电化学方法检测灌流液中的HA和NE,以确证交感组胺的释放。实验的目的是初步探讨交感组胺对血管舒缩功能的影响,并进一步证明交感组胺的递质特性。 1高效液相色谱电化学法同时测定组胺和去甲肾上腺素的方法优化 为同时检测组胺和去甲肾上腺素的释放含量,我们对已有的高效液相色谱电化学检测方法进行了改进,不但克服了原方法步骤繁琐、操作不便等不足,还提高了检测灵敏度。本方法以邻苯二甲醛(OPA)和2-巯基乙醇(2-ME)按适当比例配制的混合溶液作为衍生试剂,对HA和NE进行柱前衍生,并分别以3-甲基-组胺(3-M-His)和3,4-二羟基苄胺(DHBA)作为HA和NE的内标。同时考察了衍生条件如衍生反应pH值、衍生试剂中2-ME的含量、衍生反应时间,以及色谱条件如检测电位等对目标峰响应值的影响。测定组胺的工作曲线回归方程为Y = 0.868 X - 0.1233,3-M-His为100 ng/ml,相关系数γ= 0.9992,线性范围为0.25~10 ng/ml。测定去甲肾上腺素的工作曲线回归方程为Y = 0.0832 X - 0.1601,DHBA为500 ng/ml,相关系数γ= 0.9995,线性范围为2.5~100 ng/ml。HA和NE的检出限分别为0.125 ng/ml和1.25 ng/ml。本法操作简便,灵敏度高。 2交感神经源性组胺释放对电刺激条件下兔耳血管舒缩功能的影响 使用离体灌流的完整兔耳,研究不同频率的交感神经刺激引起的组胺释放对血管舒缩功能的影响。对耳后神经分别给予10 Hz、20 Hz和40 Hz的电刺激,并在恒压灌流条件下,观察不同的组胺受体拮抗剂对灌流液流速的影响。灌流液的流速在一定程度上可反映血管的舒缩状态。结果显示:三种刺激频率均能引起恒压灌流兔耳的流出液流速下降;H1受体拮抗剂氯苯那敏能够部分拮抗20 Hz及40 Hz电刺激引起的流速降低效应(P﹤0.05);应用肥大细胞脱颗粒剂化合物48/80耗竭肥大细胞中的组胺后,H1受体拮抗剂仍能抑制电刺激引起的流速降低。相反,H2受体拮抗剂西咪替丁能增强电刺激引起的流速降低效应,且只针对更高的刺激频率(40 Hz,P﹤0.05)。此外,在H3受体拮抗剂噻普酰胺的作用下,三种频率的电刺激所引起的血管收缩都更为显著(P﹤0.05)。预先耗竭肥大细胞来源的组胺,仍能检测到电刺激引起的组胺释放,且其与NE为共同释放。10 Hz时检测到的组胺为0.52±0.71 pmol/ml,20 Hz为3.23±0.94 pmol/ml,40Hz时为4.76±1.17 pmol/ml,随着刺激频率的增加组胺的释放量也有所增加(P﹤0.01, 20 Hz vs 10 Hz; P﹤0.05, 40 Hz vs 20 Hz)。结果提示,实验中的电刺激能够引起组胺释放,这种释放来自于交感神经而非肥大细胞,组胺的释放量有一定的频率依赖性。不同条件下,通过激动不同的组胺受体,交感组胺能分别介导突触前调节、突触后血管收缩或舒张效应。 结论:(1)组胺能够从支配兔耳血管的交感神经末梢释放;(2)交感神经来源的组胺能够通过激动突触前组胺H3受体负反馈调节刺激交感神经引起的血管收缩;(3)在不同条件下,交感组胺能够通过激动血管上的H1或H2受体分别介导血管的收缩与舒张。


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