收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

牛肉、猪肉及牛粪中大肠杆菌O157的分离鉴定及其HEp-2细胞粘附基因的发现

周志江  
【摘要】: 在1996年9月到11月期间,从长春市数个自由市场分别采集牛肉 和猪肉样品40和30份。在1997年5月到8月期间,从长春市两个农 场和两个屠宰场采集牛粪样品176份。采用改良的大豆蛋白冻肉汤 (mTSB)进行增菌、用山梨醇一麦康凯琼脂培养基(SMAC)作为鉴别培 养基等分离培养法,经聚合酶链式反应及血清凝集试验等从2份牛肉 (5%)、1份猪肉(3.3%)和3份牛粪(1.7%)样品中检出产志贺毒素大 肠杆菌O157,除一株从猪肉分离的菌株96009的血清型为O157:NM (nonmobile)外,其余各分离株均为O157∶H7,另外还从一份牛粪样 品中分离出一株产志贺毒素大肠杆菌08。上述所分离的所有菌株均为stx (志贺毒素基因)和eae(大肠杆菌粘附和微绒毛脱落基因)阳性, 除猪肉分离株96009只产生志贺毒素(Shiga toxin,Stx)2外,其余 各分离株菌同时Stx1和Stx2,从这些菌株中检出噬菌体型4、8和47, 两个从牛肉分离的菌株及以往从我国山东省病人分离的一株产志贺毒素 大肠杆菌O157∶H7菌株的噬菌体型均为4,而且具有相似的脉冲场凝 胶电泳图谱。本试验在国内首次建立了从食品和动物中分离鉴定大肠杆 菌O157的方法和程序,首次从食品和动物分离出大肠杆菌O157,首次 对分离自不同样品的大肠杆菌O157的生物学性状进行了全面鉴定。以 上结果表明在我国长春地区牛是大肠杆菌O157的带菌动物,该地区的 牛肉和猪肉受到了大肠杆菌O157的污染,人有受到其感染的危险。 将产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7菌株97094培养于含有不同浓度 的萘啶酮酸(NA)的MacConkey琼脂平板上,获得对萘啶酮酸有抗性的 菌株。用含有自杀性质粒pRT733的供体菌SM10λpir和抗萘啶酮酸的 97094菌株做接合试验,使转座子TnphoA转入受体菌97094,那些插入 到信号序列下游的变异体具有Km~r,NA~r表型,并在含有Km、NA、和XP 的LB琼质平板上形成兰色菌落。对503个Km~r、NA~r的兰色菌落,测定 了它们对HEp-2细胞的粘附性,其中有6株失去了对该细胞的粘附作用, 用BamnL限制性内切酶对这些菌株的全细胞DNA进行酶切,用T4DNA连 接酶将其连接于用相同的酶处理的质粒载体PBR322中,转化至受体菌 DH5a,挑选那些具有Aa”、Km”的克隆,根据TnPhOA融合接点处的PhoA 的洲A序列设计合成引物,对各克隆中h加M上游的大肠杆菌 O157: H7的DNA片段部分进行测序,测序结果做BLAST搜索,发现有4个变异 体的TnPhOA插入到己知的与大肠杆菌O157粘附作用有关的紧密素基因 eae中,有2个变异体的TnPhoA分别插入到eae之外的核昔酸序列中, 其中变异体 44-l的 TnPhOA插入到大肠杆菌 O157:H7的一个功能未知 的菌毛分于伴侣基因ycbR中,变异体47l的TnPhOA插入到了大肠杆 菌O157:H7的一个功能未知的24182基因的起始密码和一10序列之间。 这项研究表明,除紧密素等己知粘附因子外,大肠杆菌 O157:H7尚有 其它因子参与对真核细胞的粘附,这些新因子的确切粘附作用还有待进 一步阐明。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;原来吃肉还有这个经典学问[J];科学大观园;2006年15期
2 姜英杰;邹晓葵;吴菊清;彭增起;;假单胞菌在猪肉上生长预测模型的建立与验证[J];贵州农业科学;2010年08期
3 崔浩;陈耀强;唐勇;向军俭;徐霞玲;颜露;;莱克多巴胺荧光胶乳颗粒免疫层析检测法的建立[J];分析测试学报;2011年07期
4 侯霞;董学畅;杨光宇;胡秋芬;韩勇;;快速分离柱HPLC测定猪肉中氟喹诺酮类兽药的残留[J];云南民族大学学报(自然科学版);2007年03期
5 戴宽;郝鹏飞;;谁动了我的五花肉[J];新知客;2007年07期
6 胡耀华;郭康权;野口刚;河野澄夫;佐竹隆显;;基于近红外光谱检测猪肉系水力的研究[J];光谱学与光谱分析;2009年12期
7 梁立慧;;浅议猪肉产品加工及防疫[J];黑龙江科技信息;2011年06期
8 谷宗藩;;猪肉絛蟲的囊尾蚴熱力致死試驗[J];山东大学学报(理学版);1955年01期
9 潘天太;R_(10)培养基[J];微生物学通报;1982年05期
10 王林云;;“猪年”说猪[J];生物学通报;2007年01期
11 时卫干;;猪肉涨价与脆弱的农产品链条[J];今日科苑;2007年15期
12 ;八方资讯[J];科技致富向导;2007年20期
13 薛涌;;硕士“猪肉佬”与“专业对口”[J];科学生活;2009年03期
14 王玉明;任兵兴;马琴;胡晓倩;王静凤;薛长湖;;摄食鱿鱼对小鼠脂质代谢的影响[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2009年03期
15 廖彪;;猪肉中硒含量的测定[J];内江科技;2011年06期
16 高宝玉;;荷兰人试图在实验室里种植环境友好型猪肉[J];世界环境;2007年03期
17 腾轶超;李岳;黄岚;丁海曙;;猪肉组织色素浓度的近红外无损检测[J];光谱学与光谱分析;2010年01期
18 张根伟;文星;王忠义;赵东杰;黄岚;;基于稳态空间分辨光谱技术的猪肉嫩度测量方法研究[J];光谱学与光谱分析;2010年10期
19 胡耀华;熊来怡;蒋国振;刘聪;郭康权;佐竹隆显;;基于可见光和近红外光谱鲜猪肉蒸煮损失和嫩度检测的研究[J];光谱学与光谱分析;2010年11期
20 高明;;猪肉变“牛肉” 真假牛肉如何辨别[J];科技致富向导;2011年13期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 丁琳琳;孟军;;猪肉价格风险预警模型的建立与应用[A];畜牧业环境、生态、安全生产与管理——2010年家畜环境与生态学术研讨会论文集[C];2010年
2 黄英伟;张法瑞;;中国商品猪基地县建设(1983—1989年)——兼论对城市猪肉供给的作用[A];养猪三十年记——纪念中国改革开放养猪30年文集(1978-2007)[C];2010年
3 魏凤仙;李绍钰;孔祥书;舒畅;王琳燚;;日粮中不同来源多不饱和脂肪酸对育肥猪生长性能和猪肉脂肪酸组成的影响[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
4 武志雄;胡江涛;郑卫东;盛毅;阴文娅;;猪肉及其产品中阿维菌素类药物残留的液相色谱-串联质谱分析方法研究[A];“全国老年营养学术研讨会”暨“四川省营养学会成立二十周年庆祝会”会议录[C];2008年
5 石榴红;刘晓璇;;国家生猪及猪肉价格调控政策有效性实证分析[A];经济发展与管理创新--全国经济管理院校工业技术学研究会第十届学术年会论文集[C];2010年
6 王良佑;;“猪肉大米粥”度荒[A];老兵话当年(第三辑)[C];2002年
7 姚民仆;;中国猪产业化中的几个经济问题[A];中国猪业发展大会论文集[C];2004年
8 黄金林;何蕊;许海燕;苏洁;潘志明;焦新安;;猪肉加工、流通过程中主要食源性病原细菌的监测[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
9 胡耀华;郭康权;铃木孝范;野口刚;佐竹隆显;;近红外光谱法检测猪肉的系水力的研究[A];2007年中国农业工程学会学术年会论文摘要集[C];2007年
10 张法明;赵莹;金培刚;吴平谷;韩见龙;任一平;;浙江省市售猪肉及内脏盐酸克仑特罗残留情况调查与控制对策[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周志江;牛肉、猪肉及牛粪中大肠杆菌O157的分离鉴定及其HEp-2细胞粘附基因的发现[D];中国人民解放军军需大学;2001年
2 陈超;猪肉行业供应链管理研究[D];南京农业大学;2003年
3 孙世民;大城市高档猪肉有效供给的产业组织模式和机理研究[D];中国农业大学;2003年
4 董银果;SPS措施对猪肉贸易的影响及中国遵从方略研究[D];西北农林科技大学;2005年
5 孙京新;冷却猪肉肉色质量分析与评定及肉色稳定性研究[D];南京农业大学;2004年
6 柳巨雄;动物源性大肠杆菌O157对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药相关机制的研究[D];吉林大学;2005年
7 陈国顺;子午岭野家杂种猪和合作猪肉质特性比较及风味挥发性成分的提取与分析[D];甘肃农业大学;2004年
8 吴秀敏;我国猪肉质量安全管理体系研究[D];浙江大学;2006年
9 李梦云;猪PRKAG3基因表达规律及其与肉质关系的研究[D];四川农业大学;2006年
10 余小领;冷冻和解冻工艺对猪肉保水性和组织结构的影响研究[D];南京农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 周行;基于物联网的我国猪肉供应链管理研究[D];河南工业大学;2011年
2 韩笑;有机猪肉生产中HACCP的应用与陕西有机猪肉的发展研究[D];西北农林科技大学;2011年
3 马冰冰;我国猪肉市场系统稳定分析[D];辽宁师范大学;2011年
4 唐晓阳;冷却猪肉的货架期预测模型[D];上海海洋大学;2010年
5 冯翔宇;重庆市主城区动物携带大肠杆菌O157的流行病学研究[D];重庆医科大学;2002年
6 王培强;基于RFID与条码技术的猪肉追溯管理信息系统分析与设计[D];北京工业大学;2012年
7 邹英子;传统良种猪肉与瘦肉型猪肉挥发性风味成分的差异分析[D];合肥工业大学;2012年
8 周德;我国猪肉价格波动风险与调控机制研究[D];南京农业大学;2010年
9 王振平;中国猪肉产品国际竞争力研究[D];河南大学;2010年
10 戴迎春;猪肉供应链垂直协作关系研究——以江苏省为例[D];南京农业大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李胜荣 全军;商州大力整顿猪肉市场[N];商洛日报;2007年
2 张立平;三措施确保猪肉供给[N];天津日报;2007年
3 本报记者 范武平;猪肉价格为何居高不下[N];武威日报;2007年
4 本报评论员 黄小慧;猪肉随想[N];亚太经济时报;2007年
5 毛建国;猪肉价格降下去 政府智慧显出来[N];中国特产报;2007年
6 记者 李林;省会猪肉价格仍低于全国均价[N];河南日报;2008年
7 记者 林晓丽 通讯员 徐健生;今年猪肉零售首次涨价[N];广州日报;2009年
8 证券时报记者 岩雪;今年通胀或不再关“猪”事[N];证券时报;2010年
9 广东省价格监测中心 曾幸福 谢宏量;四月份广东省猪肉价格继续下降[N];亚太经济时报;2010年
10 深圳商报记者 郑恺 实习记者 孙翊 实习生 王小萌;猪肉零售价两三月内上调?[N];深圳商报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978