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共表达NDV F、IBDV VP0基因的重组鸡痘病毒构建及其实验免疫研究

夏志平  
【摘要】: 将NDV F基因和IBDV VPO基因分别置于人工合成的复合启动子ATI·p7.5×20的下游,将两个表达单元以复合启动子反向方式连接,插入TK基因中,得到两个复合启动子分别调控两个不同基因的重组转移质粒pVPO-2ATI·p7.5×20-F,经酶切鉴定重组转移质粒构建正确。 将转移质粒pVPO-2ATI·p7.5×20-F用DOTAP Liposomal转染预先感染0.1MOI FPV的CEF细胞,收获病毒后再经BrdU处理后的CEF细胞传代三次。经过挑斑纯化、扩增培养后用间接免疫荧光法筛选表达NDV蛋白的重组鸡痘病毒。同时将其细胞裂解液经聚丙烯凝胶电泳分离、Western Blot检测同时表达NDV或IBDV蛋白的重组病毒。结果从19株病毒中有2株病毒(vFV282a、vFV282b)能正确地表达目的蛋白,并具有良好的抗原活性。 通过CEF细胞、SPF鸡胚、SPF鸡以及商品鸡对实验用重组鸡痘病毒vFV282、NDV E48F8株、IBDV BC6/85 F4株和FPV 102株进行了培养、毒价测定、半数致死量测定、半数感染量测定,为进一步开展重组鸡痘病毒vFV282的免疫原性及免疫保护性研究作准备。 将重组鸡痘病毒vFV282经翼蹼刺种10日龄商品Leghorn公鸡,并于刺种后1wk、2wk、3wk分别进行特异性抗体水平和淋巴细胞转化能力检测,结果发现重组鸡痘病毒vFV282能诱导免疫鸡体产生良好的免疫反应,并能抵抗致死量NDV E48F8株强毒的攻击。 又将重组鸡痘病毒vFV282经翼蹼刺种7日龄商品肉鸡,并于刺种后1wk、2wk、3wk分别进行病毒中和试验和淋巴细胞转化能力检测,结果发现重组鸡痘病毒vFV282能诱导肉鸡产生病毒中和抗体、诱发较高的细胞免疫水平,并能抵抗致死量NDV E48F8株强毒的攻击。 用重组鸡痘病毒vFV282免疫3周龄SPF鸡,于免疫后20d同时攻击致死量的NDV E48F8株、IBDV BC6/85 F4株、FPV 102株病毒评价其免疫保护力。结果表明该重组鸡痘病毒能使免疫鸡产生抗鸡痘的免疫保护力的同时能抵抗NDV和IBDV强毒的攻击。实验结果说明重组鸡痘病毒可以作为疫苗备选株进一步进行研究与开发。


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