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新城疫病毒HN基因抑瘤效应机制的研究

葛涛  
【摘要】: 本研究利用pIRESlneo载体,构建了pIRHNcc、pIRHNsp、pIRFcc、pIRFsp、pIRHNFcc五个核酸表达质粒;在本实验的后期,又利用新的真核表达载体pVAXl构建了pVHN核酸表达质粒。将构建的核酸表达质粒分别转染肿瘤细胞(Hela细胞和OS732细胞)采用血凝效价测定及Western blot分析,检测其HN表达活性。经检测,HN蛋白的表达量以pVHNcc最高,pIRHNcc、pCHNcc次之,pIRHNFcc较低。经间接免疫荧光试验证实,HN蛋白主要存在于转染细胞的胞膜上,有时可在胞浆中也可观察到特异的黄绿色荧光。 本实验利用细胞生长抑制实验、吖啶橙染色及染色体DNA电泳等方法,研究了含NDV病毒的重组质粒对肿瘤细胞的影响,证明NDVcc的HN基因(HNcc)有一定的诱导凋亡的作用。NDV病毒HN的全部核酸表达质粒均能抑制肿瘤细胞的生长并造成细胞骨架的破坏。 本实验成功复制C57BL/6鼠的B16肿瘤模型。在肿瘤模型上均进行核酸表达质粒单独或联合NDVcc体内抑瘤效应的观察,同时设单纯荷瘤组和NDVcc病毒组对照。在B16肿瘤模型中,小鼠左后肢皮下接种2×10~5/鼠B16细胞,于接种后第2、15、25天肿瘤局部注射100ug重组质粒,同时设荷瘤对照组和NDVcc组。NDVcc组、pVHNcc及pVHNcc+NDVcc组荷瘤的肿瘤增长有减慢的趋势,但与对照组相比相差不显著。NDVcc、pVHNcc及pVHNcc+NDVcc较荷瘤对照鼠的临床症状较轻、肿瘤包膜较为完整,肝、脾和肾转移程度稍轻;其CTL活性和NK活性增加。pVHNcc、NDVcc、和pVHNcc+NDVcc组肿瘤生长明显受到抑制。各实验组较荷瘤对照组唾液酸含量均显著下降。


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