收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

成纤维细胞生长因子-18上调动脉壁弹力纤维表达的体外试验研究

卫任  
【摘要】:【目的】 构建携载人成纤维细胞生长因子-18的慢病毒,并感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和股动脉平滑肌细胞(HASMC),研究该因子过表达状态下,对这两种细胞合成弹力纤维的影响效应,为下一步体内试验研究FGF-18重建主动脉壁弹力纤维的效果初探方向。 【方法】 1.构建携载人FGF-18基因并有flag和GFP标签的慢病毒载体质粒,通过293T细胞进行慢病毒包装,并将包装后病毒感染293T细胞,通过观察细胞荧光表达,和检测FGF-18蛋白表达量,验证该慢病毒包装效果; 2.通过免疫细胞化学染色技术鉴定FGFR-2在HUVEC和HASMC中的表达情况; 3.以不同MOI值的慢病毒分别感染HUVEC和HASMC,确定两种细胞慢病毒感染的最佳MOI值,对感染效率不佳的细胞通过流式细胞仪进行筛选; 4.两种细胞各设立实验组、空载体对照组和空白对照组,通过real-time PCR、Elisa法及western-blot法检测各组细胞FGF-18、FGF受体-2(FGFR-2)、弹力蛋白原(elastin)、微纤维蛋白-1(fibrillin-1)及fibulin-5在mRNA水平和蛋白水平的表达量,通过激光共聚焦显像技术观察各组弹力纤维含量的差异,最终采用MTT法评价各组细胞增殖状态的差异。 【结果】 1.经PCR检测和测序鉴定,成功构建携载人FGF-18基因的慢病毒载体质粒,经293T细胞包装后所得慢病毒滴度为3.45×108IU/ml; 2.Lentivirus-FGF-18感染293T细胞后,观察到明显的荧光表达,且MOI=10时检测到FGF-18蛋白高表达; 3.HUVEC的细胞膜和胞核上可见FGFR-2的阳性染色,HASMC在细胞膜上可观察到FGFR-2的阳性染色; 4.HUVECM最佳MOI值为20,而HASMC以MOI=160感染时,实验组与空载体对照组荧光表达率均低于30%,经流式细胞仪筛选后,两组荧光表达率均达90%以上; 5.经real-time PCR检测,HUVEC实验组中FGF-18、FGFR-2、elastin的mRNA较其他两组有明显增高(P0.05),fibulin-5和fibrillin-1的mRNA三组间无明显差异(P0.05);HASMC实验组中仅FGF-18和FGFR-2的mRNA较其他两组有明显增高(P0.05),而elastin和fibrillin-1的mRNA三组间无明显差异(P0.05); 6.经Elisa法检测,HUVEC实验组FGF-18表达量较其他两组高,而HASMC实验组未发现FGF-18高表达; 7.经western-blot检测,HUVEC实验组的fibulin-5较其他两组有高表达趋势,三组间elastin无明显表达量差异;HASMC实验组elastin和fibulin-5的表达量较其他两组反而减少; 8.通过激光共聚焦显像技术观察到,HUVEC实验组中弹力纤维的荧光染色量较空载体对照组有明显提高,而HASMC的实验组未有明显阳性结果; 9. MTT法检测到HUVEC和HASMC实验组的OD值较空载体对照组均明显增高(P0.05)。【结论】 1.采用三质粒包装系统能够成功完成lentivirus-FGF-18的包装; 2.HUVEC和HASMC至少在细胞膜表面存在FGFR-2; 3.lentivirus-FGF-18感染HUVEC和HASMC后,两种细胞的FGF-18在mRNA水平过表达; 4.FGF-18能够促进HUVEC合成弹力蛋白和fibulin-5,并能够促进其增殖; 5.尚不能认为FGF-18对平滑肌细胞合成弹力纤维有促进作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孙大麟;鼠颞颌关节中弹力纤维的分布及其定量分析[J];上海第二医科大学学报;1996年03期
2 李冰,刘同慎,马云;介绍一种长效Weigert弹力纤维染色液[J];滨州医学院学报;2001年06期
3 ;真皮弹力纤维疾病[J];中国医学文摘(皮肤科学);2005年06期
4 苗兰卿;;舌病理形态学研究——关于舌根弹力纤维(二)[J];国外医学.口腔医学分册;1983年03期
5 周双文,霍建民,石玉枝,刘兴汉,李艳波,谷正兆;利用弹性蛋白酶抑制剂预防肺气肿的实验研究——Ⅱ.丹参对人弹力纤维的保护作用及对实验性肺气肿的预防效应[J];哈尔滨医科大学学报;1989年06期
6 裴振环,周桂芝;Favre—Racouchot综合征一例[J];中国皮肤性病学杂志;1989年02期
7 陈大庆;心内膜弹力纤维增生症五例临床病理分析[J];温州医学院学报;1996年03期
8 刘平,王俊民,王冬云,袁景奕,谭升顺,张盘谏,陈明霞;弹性假黄瘤样真皮乳头层弹性纤维溶解症国内首例报告[J];中国皮肤性病学杂志;2005年05期
9 ;真皮弹力纤维疾病[J];中国医学文摘(皮肤科学);2011年01期
10 孙明辉,赵永江,谌苏春;心内膜弹力纤维增生症二例[J];中华放射学杂志;1996年02期
11 ;真皮弹力纤维疾病[J];中国医学文摘.皮肤科学;1996年01期
12 卢庆林;生前伤与死后伤皮肤弹力纤维变化研究[J];法医学杂志;1999年01期
13 李冰,刘同慎,马云;长效Weigert弹力纤维染色液染色效果分析[J];滨州医学院学报;2002年02期
14 刘晓云,丁芳;老年心内膜弹力纤维增生症1例的超声表现[J];中国超声医学杂志;2003年12期
15 王文棣,马少春;小儿心内膜弹力纤维增生症的诊治[J];医学临床研究;2004年08期
16 许冠英,陈琍,闫雪燕;心内膜弹力纤维增生症合并肾病综合征2例[J];临床荟萃;2005年10期
17 苗兰卿;;舌病理形态学研究——关于舌体弹力纤维(一)[J];国外医学.口腔医学分册;1983年03期
18 苏敬泽;D-青霉胺导致匐行性穿通性弹力纤维病和弹性假黄瘤样皮肤改变[J];国际皮肤性病学杂志;1986年05期
19 张虹亚,盛仲灵;播散性穿通性弹力纤维病一例 [J];中华皮肤科杂志;1995年05期
20 曹静芬;心内膜弹力纤维增生症5例报告[J];临床儿科杂志;1995年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 苗凯;郭敏;安磊;许晓玲;武韩;王栋;吴中红;田见晖;;低滴度慢病毒生产转基因胚胎和小鼠的新方法[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
2 宋玉文;韩文霞;高聆;于春晓;;慢病毒介导绿色荧光蛋白感染大鼠肾小球系膜细胞实验研究[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
3 王旭东;仲人前;;慢病毒载体介导microRNA-21抑制体的构建与转染[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
4 贾雪松;曹玉文;钟文英;王娟;王海霞;;环状弹力纤维溶解性巨细胞性肉芽肿一例[A];中华医学会第16次全国皮肤性病学术年会摘要集[C];2010年
5 陈子馨;郭惟;卞明;王跃;盛瑞红;刘颖;;常人皮肤弹力纤维的扫描电镜观察[A];第五次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1988年
6 魏梦绮;;TFR和VEGF基因双顺反动子慢病毒感染骨髓基质细胞的研究[A];中华医学会第十八次全国放射学学术会议论文汇编[C];2011年
7 怀磊;王翠翠;张翠萍;李其辉;唐克晶;邢海燕;饶青;王敏;王建祥;;慢病毒介导的RNA干扰抑制MEIS1的表达对NB4细胞增殖、凋亡、分化影响的研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
8 郭毅;赵元立;潘琳;白杰;;小凹蛋白的表达及Ⅰ型Ⅲ型胶原比值在脑血管畸形中的意义[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
9 陈帅;李浩博;李牧;李双;赵培林;;基于树突状细胞的肿瘤疫苗构建及其抗肿瘤效应研究[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
10 李承新;沈华;王雷;高天文;;丘疹性弹力纤维溶解症:13例临床及组织病理学观察[A];2009全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈春经;慢病毒载体介导胰岛素样生长因子-1基因修饰肌源性干细胞移植治疗雌性压力性尿失禁大鼠的实验研究[D];福建医科大学;2012年
2 胡晓;雌激素受体α对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的抑制作用[D];重庆医科大学;2011年
3 周建松;HPV16E6/E7共同启动子shRNA慢病毒的构建及其对宫颈癌细胞株抑制作用的体内外研究[D];浙江大学;2012年
4 朱煊;重组慢病毒CXCR7-shRNA对人膀胱癌细胞生物学行为影响的研究[D];中南大学;2012年
5 赖颖晖;慢病毒介导α-反义寡核苷酸对β-地中海贫血小鼠的作用[D];广西医科大学;2010年
6 周海涛;慢病毒介导的Nanog基因对周围神经损伤性神经病理性疼痛模型脊髓突触重塑的影响[D];福建医科大学;2012年
7 刘涛;慢病毒介导的Foxa2和Hnf4a组成性表达对胚胎干细胞向肝细胞分化的影响[D];第三军医大学;2009年
8 田青水;慢病毒介导的RECK基因治疗胰腺癌的实验研究[D];苏州大学;2011年
9 张旭东;慢病毒介导的Bcl-2基因RNAi联合TRAIL基因共表达对淋巴瘤细胞生长作用研究[D];郑州大学;2012年
10 吴波;慢病毒介导hVEGF165-GFP基因转染内皮祖细胞移植治疗MODS后器官微血管密度变化的研究[D];第二军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 卫任;成纤维细胞生长因子-18上调动脉壁弹力纤维表达的体外试验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
2 陈维;慢病毒介导转基因小鼠胚胎的初步研究[D];华中农业大学;2011年
3 孙克宁;利用慢病毒载体制备转基因小鼠和牛胚胎的研究[D];河南农业大学;2011年
4 张旭;miR-122对HBV感染的肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究[D];第四军医大学;2012年
5 毛亚江;肿瘤转移抑制蛋白Mtss1慢病毒干扰载体的构建和鉴定[D];湖南师范大学;2010年
6 黄敏;重组慢病毒载体介导艾滋病毒Rev蛋白调控卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解性周期复制的研究[D];南京医科大学;2010年
7 陈丽妹;Grb2抑制对肠癌细胞HT29肿瘤相关信号转导的影响[D];福建医科大学;2012年
8 韩腾龙;用慢病毒载体介导癌基因建立细胞衰老的模型[D];第四军医大学;2010年
9 刘汉屈;Hyper-IL-6重组慢病毒促肝细胞增殖及对大鼠急性肝衰竭保护作用的实验研究[D];重庆医科大学;2010年
10 王朝莉;HBVprec/c shRNA慢病毒真核表达载体的构建及其对HBV增值的影响[D];重庆医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 刘阳;俄泳衣市场日渐红火[N];远东经贸导报;2006年
2 何东铃;冬季莫让颜早衰[N];医药养生保健报;2007年
3 本报记者 李茗芳;弹性纤维 要多弹就有多弹[N];中国纺织报;2006年
4 本报记者 李满勋;靠高新技术拓展中国市场[N];中国纺织报;2006年
5 本报记者 李茗芳;爆发:给予面料轮回和创造[N];中国纺织报;2007年
6 发布机构 意大利蕾拜尔时尚设计机构;2008春夏面料流行趋势解读[N];中国纺织报;2007年
7 中国中医科学院西苑医院血管外科 庄百溪石波;小球囊拯救糖尿病足[N];健康报;2007年
8 刘辉;血管的种类和功能[N];医药养生保健报;2007年
9 魏纹孙林潮;光子嫩肤帮你焕发青春[N];健康报;2008年
10 金 昌;四种衣着易得病[N];中国中医药报;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978