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11,12-环氧花生三烯酸对猪冠状动脉平滑肌细胞超极化作用的实验研究

郭建中  
【摘要】:目的 冠脉循环中内皮细胞通过释放一氧化氮(EDNO) 、EDHF和 PGI。三种因子共同作用于血管平滑肌细胞,维 持有效冠脉血流。其中,前两种为主要因子~[1]。EDNO的 作用机制已经明确,其舒血管机制易受体外循环中缺血再 灌注损伤的影响,且 NO 替代疗法已取得明确的疗效;尽 管 EDHF 是何物质和作用平滑肌细胞的机制还不清楚,但 EDHF 易受传统的高钾心肌停跳液的破坏~[2],使冠脉循环 中内皮细胞的舒血管功能受损,降低再灌注后冠脉流量, 损伤心脏的舒缩功能。目前,人们认为环氧花生三烯酸 (EETs)和Anandamide可能就是EDHF,因此,对EETs 和Anandamide的研究成为人们关注焦点。EETs共有四 个异构体,均有相同的生物化学性质。与已知的EDHF特 性有许多的相同之处。本实验通过激光扫描共聚焦显微镜 的方法,测试11,12-环氧花生三烯酸对培养的猪冠状动 第6页共67页 T“ 脉平滑肌细胞膜电位的作用,印证 EETS和 EDHF的相同 特性,探讨两者之间关系。 方法 取四只实验用小型猪的冠状动脉,采用酶解法(胶原 酶和胰酶)获取平滑肌细胞进行培养,经一次传代和免疫 组化鉴定后,再传入96 孔培养板。选择形态良好(细胞 呈校形),细胞活性稳定(荧光染色剂均匀分布在细胞膜 的两侧)的细胞进行检测和数据分析。采用自身对照方 法,每人孔一组,随机分为:EET组,每孔经激光共聚焦 扫描5 次测试基础膜电位,再加入11,12-EET 门 几’])扫描 3 5 次观察膜电位变化;优降糖 mLB)组,八孔均加入优降糖0.smicroM几’]后,每4Lil 激光共聚焦扫描 5 次测试基础膜电位,再加入 11,1卜 EET门 儿)扫描 3 5 次观察膜电位变化;四乙胺 (TEA)组,八孔均加入四乙胺 10microM/LI‘]后,每3Utl 激光共聚焦扫描 5 次测试基础膜电位,再加入 11,12- EET门 儿)扫描 3 5次观察膜电位变化。 结果 将 12-EET作用后膜电位与作用前基础膜电位进行 t匕较,并 @己对 t检验。E E T组:11,12-E E T b。入后,if起 猪冠状动脉平滑肌细胞膜电位超极化,作用后膜电位值与 第7页共67页解放军军医进修学院硕士论文 11,12一环氧花生二烯酸对猪冠状动脉平 滑 细胞 化作用的实验研究 基础膜电位值相比存在显著性差异*叫1,P<0刀01\ GLB组:11,12-EET加入后 sl起猪冠状动脉平滑肌细胞 膜电位超极化,作用后膜电位值与基础膜电位值相比存在 显著性差异(fi—8,P<0.00);TEA组:11,12-EET加N 后不引起猪冠状动脉平滑肌细胞膜电位超极化,作用后膜 电位值与基础膜电位值相比不存在显著性差异*=23, P>0.05) 结论 11,12-EET具有明显的使冠状动脉平滑肌细胞超极 化的作用;ATP敏感钾离子通道阻断剂优降糖无法阻断其 对平滑肌细胞的超极化作用,可见 11,12-EET对平滑肌 细胞的超级化作用不是通过ATP敏感钾离子通道;钙离子 依赖钾离子通道阻断剂四乙胺阻断了其对平滑肌细胞的超 极化作用,说明 11,12-EET对平滑肌细胞的超级化作用 是通过钙离子依赖钾离子通道实现的。由此可见,11, 12-EET具有对猪冠状动脉平滑肌细胞的超极化作用,l 这种作用机制通过钙离子依赖通道来实现,这与EDHF的 特性一致,所以推断 11,12-EET可能就是 EDHF。


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