收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Balb/C小鼠及HBV转基因鼠对不同基因疫苗的免疫应答实验研究

邓涛  
【摘要】:目的:为寻求高效的HCV/HBV联合基因免疫策略,研究免疫刺激DNA序列联合 基因免疫在Balb/C小鼠的免疫应答及在HBV转基因鼠的抗病毒效应。 材料与方法: 1.分别将与HCV核心区基因互补的cDNA和HBV核心区基因克隆于含两套表达 单元的真核双表达载体的 CMV启动子和 RSV启动子下游(pRSC-HBV/HCV),转染 SP2/0细胞,通过免疫荧光和Western印迹法观测蛋白的表达,免疫Balb/c 小鼠, 用酶联免疫法[ELISA]检测血清抗-HBc及抗-HCV抗体的转换,通过LDH释放法 观察小鼠脾细胞对表达HBcAg及HCV核蛋白的SP2/0细胞的特异性杀伤活性,并通 过荷瘤试验观察小鼠注射表达HBcAg及HCV核蛋白的SP2/0细胞后肿瘤生长情况以 判断体内CTL活性。 2.通过PCR扩增在HBV核心区3’端引入4个拷贝的CpG序列,定向克隆于卡拉 霉素抗性基因的 VR1012为载体(V-HBc/CpG)。同时从质粒pcDNA-HBV经酶切,回收 其中1KB的不含CpG序列的HBV核心区基因,定向克隆于V-1012(V-HBc)。并人 工合成硫代修饰的免疫刺激DNA寡核苷酸[CpG ODN]及非免疫刺激寡核苷酸[非 CpG ODN],分组免疫Balb/c小鼠,用ELISA检测血清抗-HBc抗体的转换,通过 LDH释放法观察小鼠脾细胞对表达HBcAg的SP2/0细胞的特异性杀伤活性,并通过 荷瘤试验观察小鼠注射表达HBcAg的SP2/0细胞后肿瘤生长情况以判断体内CTL活 性。 3.用CpG ODN与HBV S区基因真核表达载体(V-HBs)联合免疫HBsAg转基因 鼠,用ELISA观察小鼠血清HBsAg及抗体转换,通过免疫组化 [SP法]、病理HE 染色及电镜观察小鼠肝组织HBsAg表达量的改变、肝组织炎症活动度及超微结构的 变化。 结果: 1.pRSC-HBV/HCV转染SP2/0细胞可见游离 HBcAg及HCV核蛋白的表达,5只免 疫鼠中全部出现抗一HCV及抗一HBV抗体,小鼠脾细胞对转染pRSC-HBV/HCV的 SPZ/0细胞的特异性细胞毒活性为sl%,明显高于空载对照组,荷瘤试验显示免疫 组小鼠注射转染pRSC-HBV/HCV的驴/0细胞2周时肿瘤平均直径为7.25土 豆.15mm,明显小于空载对照组小鼠肿瘤直径门.85士0.25mm),二者差异显著 (P<0.05)。注射肿瘤细胞后3周,2只pRSC-HCV/HBV免疫组小鼠仍然存活,而对 照组则全部死亡。 2.免疫刺激DNA序列联合基因免疫实验显示,V-HBC+CPG ODN组及V一 HBC/CpG组免疫鼠脾细胞对转染pRSC-HBV的SP2/0细胞的特异性细胞毒活性分别 为 18%、60%,均高于 V-HBC+非 CpG ODN组及 V-HBC对照组。荷瘤试验显示 V 一mc联合 CpG ODN组及 V一HBc/CpG在免疫 2周时肿瘤直径分另为 5.8 f 0.l恤。 4.85士0.75mm,明显小于 V-HBC联合非 CPG ODN及 V-HBC对照组门.85土0.65、 19.05士0.75j,差异显著(P<0.05)。注射肿瘤细胞后 3周,V一HBC联合 CPG ODN 组及 V-HBc/CpG免疫组小鼠仍然存活,而对照组全部死亡。 3.在HBV转基因鼠的抗病毒实验显示,V-HBS联合CpG ODN组6只免疫鼠中 有2只血清抗一ms抗体阳性,其平均效价为56.21士15.16mIWml,高于免疫保护 所需的最低水平(10ml/ml),血清HBsAg浓度在免疫后第8周时明显降低,并 有2只转阴,而单用V-HBS组及V-1012对照组小鼠血清抗一HBS抗体均阴性、 HBsAg含量无明显降低。V-HBs+CpG ODN组肝组织 HBsAg的表达量低于 V-HBs组及 对照组,差异显著(P<0.05)。V-HBS联合CPG ODN组肝组织病理及电镜观察可见 大量炎细胞浸润,炎症组织活动度积分明显高于V-HBS组及对照组。 结论:PRSC一HBV/HCV在Balb *小鼠可同时诱导对HBV及HCV的体液免疫应答 及细胞免疫应答,提示真核双表达载体可用于构建联合基因疫苗,该研究为HBV/HCV 联合基因免疫探索了新的策略。CpG ODN联合V-HBc及V一HBc/CpG在Balb/c体内 可增强其特异性的细胞免疫应答,进一步在 HBV转基因鼠的实验研究显示,CPG ODN 联合 V-HBS可增强其免疫应答及抗病毒效应。该实验证实 CpG ODN联合基因兔疫可 增强机体的免疫应答及抗HBV效应,为打破慢性乙型肝炎免疫耐受及基因兔疫治疗 探索了新的方法。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 牛淑妍;渠丽景;;基于核酸外切酶Ⅲ降解原理荧光检测乙肝病毒HBV[J];青岛科技大学学报(自然科学版);2010年06期
2 李永念,熊思东,袁志刚;原核表达系统真核化中的核定位信号对乙肝病毒(HBV)基因免疫效果的影响[J];微生物学报;2003年06期
3 杜德伟,周永兴,焦成松,冯志华,李谨革,连建奇,姚志强;白细胞介素12提高HBV基因疫苗的免疫应答[J];中国免疫学杂志;2001年04期
4 毕连华,李萍;麻醉人员乙肝病毒(HBV)感染的调查[J];菏泽医专学报;1998年03期
5 杜琼,张玲英,杨明清,李焱平;HBV前C区1896点突变的检测及意义[J];四川医学;2003年11期
6 邓涛,范公忍,陈天宝,陈乃玲,胡大荣,李琳,黄树林,贾克明;丙肝病毒(HCV)及乙肝病毒(HBV)双表达载体的构建及表达[J];中国免疫学杂志;2002年03期
7 张诒亮,姜虹;医务工作人员HBV感染情况调查[J];职业与健康;2001年09期
8 刘宝华;袁翠云;张长青;;乙肝免疫球蛋白联合乙肝疫苗阻断HBV母婴传播观察[J];医药论坛杂志;2008年16期
9 褚庆岱,高聘金;枣庄市中小学生HBV感染状况调查[J];江苏预防医学;2003年02期
10 蒋静;陈兆云;阿曼古丽·牙生;胡建军;王松;;甘露聚糖结合凝集素与HBV感染及肝功能损伤的相关性研究[J];新疆医科大学学报;2012年03期
11 陈玉;钟芝茵;吴小桃;陈志武;杨静;王升启;;抗HBV反义寡核苷酸的筛选[J];安徽医学;2011年07期
12 田玉岭,吴惠芳,殷卫卫;HBV前C区及C基因启动子变异对病毒标志物的影响[J];临床肝胆病杂志;2005年02期
13 张强强;展鹏;刘新泳;;新型乙肝病毒(HBV)抑制剂的研究进展[J];中国药物化学杂志;2012年03期
14 高晓玲;医院工作人员HBV感染调查[J];中华医院感染学杂志;1998年03期
15 高彬;董家鸿;吕文平;;HBV相关性肝细胞癌抑癌基因高甲基化现象及其机制的研究进展[J];中国肿瘤临床;2010年14期
16 慕志杰;;妊娠合并乙肝病毒(HBV)感染患者不同病毒载量与围产结局的关系研究[J];现代诊断与治疗;2017年16期
17 张相宜;柳琳;张幸国;谢方舟;;siRNA抗HBV感染领域中的化学修饰和体内传递研究进展[J];药品评价;2013年22期
18 池肇春;;HBV准种与耐药相关性进展[J];实用肝脏病杂志;2011年05期
19 叶从勇;杨旭;邓乐;;用于HBV病毒快速诊断的分子信标探针设计[J];生命科学研究;2006年S2期
20 邓涛,范公忍,胡学玲,陈佩兰,陈乃玲,胡大荣,贾克明;人工合成免疫刺激DNA联合HBsAg DNA疫苗在HBV转基因鼠的免疫应答研究[J];中国免疫学杂志;2003年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郝友华;徐春利;朱帆;丁红晖;赵西平;杨东亮;;白介素-10对HBV复制子在Balb/C小鼠体内复制影响初步研究[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年
2 刘亚男;;急/慢性HBV复制小鼠特异性免疫应答特征对比研究[A];第十一届全国免疫学学术大会壁报交流集[C];2016年
3 李军;韩超;蓝竹;韩俊峰;吴玉章;;氢化可的松处理对于HBV感染成年树鼩的影响[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年
4 张铃;颜宏利;王芳;孙树汉;;HBV插入位点与性肝癌早晚发的关联研究[A];第十四次全国医学遗传学学术会议论文汇编[C];2015年
5 段学章;柳芳芳;童晶晶;李晨;毛远丽;辛绍杰;胡瑾华;;粒细胞集落刺激因子治疗HBV相关的慢加急性肝衰竭随机临床试验研究[A];第7届全国疑难及重症肝病大会论文集[C];2013年
6 叶棋浓;韩聚强;杨晓;;雌激素受体信号途径参与HBV诱发的肝癌[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年
7 崔兰英;刘文博;;siRNA与拉米夫定抗HBV复制作用的比较[A];纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年-第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2014年
8 刘倩;董凤;;siRNA与拉米夫定抗HBV复制作用的比较[A];第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编[C];2015年
9 韩金祥;王玉林;;硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸抗HBV细胞的实验研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
10 韩国荣;赵伟;江红秀;王根菊;岳欣;王翠敏;阚乃颖;吴岷岷;;替比夫定对HBV高载量孕妇母婴阻断的效果及安全性研究[A];第二十次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邓涛;Balb/C小鼠及HBV转基因鼠对不同基因疫苗的免疫应答实验研究[D];军医进修学院;2001年
2 赵翎皓;乙肝病毒(HBV)对于肝癌宿主基因组的插入整合及其机制研究[D];第二军医大学;2016年
3 刘红;HBV蛋白相关免疫应答致HBV转基因小鼠肝组织病理损伤的研究[D];郑州大学;2003年
4 阚方明;HBV相关肝纤维化组织的蛋白质组学和转录组学研究[D];北京协和医学院;2017年
5 兰林;HBV准种特性及其与干扰素治疗关系的研究[D];第三军医大学;2002年
6 张景熙;人支气管上皮细胞和BALB/c小鼠呼吸道水通道蛋白-5的表达及其与哮喘的相关性研究[D];第二军医大学;2004年
7 赵桂琴;素馨花化学成分及抗HBV活性的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
8 汪春莲;益生菌CL22治疗Balb/c小鼠慢性胃炎动物模型的实验研究[D];中南大学;2007年
9 王宇平;HBV拉米夫定耐药基因结构与功能的研究及感染性克隆的建立[D];福建医科大学;2008年
10 周莲娣;香菇多糖对约氏疟原虫感染BALB/c小鼠红内期免疫应答调节的实验研究[D];中国医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田泽维;HBc及HBV多表位嵌合基因的构建、表达及在BALB/c小鼠体内诱导的免疫应答研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
2 郭小慧;重庆地区人群中乙肝血清特殊模式的HBV基因分型及临床自然病程分析[D];重庆医科大学;2011年
3 杨智清;同种异体原位肝移植术后预防HBV再感染的临床研究[D];第三军医大学;2005年
4 徐婕;去唾液酸糖蛋白受体参与HBV侵入人精子过程的初步研究[D];华中科技大学;2011年
5 王乙琲;乙肝相关终末期肝病肝移植术后HBV再感染的危险因素及防治[D];南方医科大学;2015年
6 张家臣;原儿茶酸体外抗HBV作用机制的研究[D];湖北大学;2011年
7 段彪;HBV在人脐血单个核细胞内的培养研究[D];大理学院;2012年
8 罗晓东;广州管圆线虫感染BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和血清抗体的变化[D];广州医学院;2012年
9 朱剑波;肝螺杆菌感染BALB/c小鼠实验模型的建立及其干扰免疫应答的初步研究[D];扬州大学;2014年
10 王瑞;皱瘤海鞘抗HBV作用的实验研究[D];第一军医大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 欣华;长期用拉米夫定易致HBV耐药株[N];中国医药报;2004年
2 杨淑娟;美揭示丙肝病毒抑制免疫系统机制[N];中国医药报;2006年
3 王振坤;携带丙肝病毒需要治疗吗[N];家庭医生报;2006年
4 记者 聂翠蓉;丙肝病毒携带者肾脏也能用于移植[N];科技日报;2017年
5 范旭;全口服直接抗丙肝病毒药上市[N];健康报;2017年
6 北京地坛医院主任医师 蔡晧东;服用丙肝药 您该知道这些事[N];健康报;2017年
7 通讯员 蒋明 记者 王玉华;首次克隆出丙肝病毒五区蛋白[N];湖北日报;2001年
8 本报记者 袁志勇 通讯员 黄显斌;小心,别让沉默杀手丙肝暗算了[N];科技日报;2009年
9 中山大学附属第三医院传染科教授 姚集鲁;肝炎家族中的老三——丙肝[N];人民政协报;2003年
10 记者 何德功;RNA片断能抑制丙肝病毒[N];新华每日电讯;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978