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光动力疗法对类风湿性关节炎治疗作用及机制的动物研究

黄乃艳  
【摘要】:目的: 类风湿关节炎(RA)是一种常见的自身免疫性疾病。其病理改变表 现为滑膜增生,血管翳形成,并逐渐出现软骨侵蚀和骨质破坏,最终导致 关节畸形及功能障碍。过度增生的炎性滑膜是导致软骨和骨破坏的关键因 素,控制和消除增生的滑膜是保护软骨、改善症状、降低致残率的关键。 光动力疗法(PDT)已广泛用于肿瘤的治疗,RA的炎性滑膜生长活跃、 代谢旺盛,类似肿瘤组织。本实验室己证明培养的滑膜细胞能迅速吸收血 啉甲醚(HMME)、PDT对滑膜细胞有明显的杀伤效应。本研究在此基础 上,利用类风湿性关节炎的动物模型,进行以下研究:(1)了解HMME 在关节组织间分布的差异;(2)了解以HMME为光敏剂的PDT效应对类 风湿性关节炎模型的治疗作用;(3)初步探索这一作用的机制。 方法: 1.用Ⅱ型胶原诱导LEW大鼠踝关节关节炎模型(CIA), 用卵蛋白 诱导兔膝关节关节炎模型(AIA)。 2.用光学多通道分析仪(OMA)进行模型关节周围皮肤、肌肉、滑 膜、软骨和血液中光敏剂含量的测定,方法为静脉注入HMME20mg/kg 后,记录荧光光谱,经处理得到光敏剂的荧光值-时间曲线。 3.PDT对CIA模型的治疗作用研究的分组方法为LEW大鼠30只, 随机分为正常对照组5只、关节炎对照组10只、治疗组15只。关节炎对 照组和治疗组用Ⅱ型胶原蛋白诱发关节炎。治疗组在大鼠出现踝关节红肿 后1周,炎症达到高峰时进行PDT治疗。随机治疗大鼠一侧的踝关节,另 .2。 一 一侧作单纯HMME 对照。治疗方法是大鼠麻醉后尾静脉注入 HMME10ngkg,20分钟后踝关节照光,激光波长627.sum,功率密度 100mwcm‘,照射时间1000秒,能量密度100)/”。治疗后避光喂养72 小时。隔日一次测量大鼠的踝关节左右横径,治疗后两周取关节进行病理 d 观察。 4.大鼠CIA模型用上述方法进行PDT治疗后,治疗组和单纯HMME 组用兔疫组化SP法检测石蜡切片的核增殖抗原(PCNA)。 5.兔AIA模型在关节炎出现第七天进行PDT治疗,随机治疗一侧 膝关节,另一侧作自身对照。兔耳静脉注入I’arrainrelomg/Kg,20分钟后, 膝关节用金蒸气激光照射,激光能量密度100)儿旷。24 /J’时后取膝关节 滑膜作病理检查,并用脱氧核昔酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TU’N’E)原位检测凋亡细胞。 结果: 1.模型观察:CIA大鼠炎症高峰期滑膜下炎细胞浸润明显,滑膜细 胞明显增殖,炎症达到高峰后二周,血管缀形成,并侵蚀和破坏软骨和骨, CIA模型病理改变与人类RA相似。兔AIA模型膝关节滑膜病理可见滑膜 细胞增生,滑膜下炎细胞浸润,也与人类RA滑膜改变相似。 2.关节周围组织中光敏剂含量的测定结果表明,各组织对HMME 的吸收速度和吸收量不同,荧光值一时间曲线不同,滑膜组织比 皮肤和软骨对 HMME的吸收多,在 2 0分钟时即有明显差异。 3.PDT对CIA模型的治疗结果表明:PDT治疗后关节炎组、单纯 HMME组和治疗组踝关节左右横径统计学检验差异没有显著性,但病理 评分PDT治疗组滑膜增生、血管资形成及软骨破坏、骨破坏和总分比关 节炎对照组和HMME对照组好,统计学检验差异有显著性。 .3_ 军医进修学院硕士学位论文 中文摘要 4.PDT治疗组PCNA阳性细胞较对照组少,图像分析结果表明面密 度(阳性染色的面积总和与统计视野面积的比值)治疗组小于对照组,统 计学检验差异有显著性。。 5.PDT治疗组凋亡阳性细胞较对照组明显增多,图像分析结果单位 视野内阳性细胞数和面密度PDT治疗组高于对照组,统计学检验差异有 显著性。凋亡细胞核直径PDT治疗组较小,与对照组相比,统计学检验 差异有显著性。 结论: 二.CIA、AIA的病理改变类似人类RA,可作为研究RA病因、发病 机制、检查及治疗方法的模型。 2.各组织对HMME的吸收速度和吸收量不同,滑膜组织比皮.


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