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劲动脉粥样硬化性狭窄家兔劲动脉内膜切除前后局部动脉壁血管内皮生长因子及其基因表达的研究

徐永革  
【摘要】:研究背景:既往有关颈动脉内膜切除(CEA)的实验研究均是在健 康动物的正常颈动脉上进行,忽略了粥样硬化这一基本病理改变, 实验结果的临床参考意义颇受影响。迫切需要建立一个能满足相 关实验研究需要的颈动脉粥样硬化性狭窄(CASS)的动物模型。 防治CEA后再狭窄,临床面临严重挑战。已有实验表明,血管内皮 生长因子(VEGF)基因或蛋白能加速球囊剥脱损伤后的大鼠颈动 脉内皮再生,减轻损伤后的肌内膜增殖,但无CEA术中应用VEGF预 防再狭窄的临床或实验报告,亦无CEA手术前后局部VEGF表达特点 的报告。 研究目的:1:探讨建立经济实用、稳定可靠的适于外科治疗研究 的CASS动物模型的条件。2:研究CASS家兔CEA手术前后局部动脉 壁VEGF及其基因表达的特点,为下一步VEGF防治CEA后再狭窄的实 验研究提供科学依据。 研究方法:实验1:以新西兰白兔为实验对象。采用血管内膜气体 干燥损伤的方法,以120ml/min的气体流量,15min的风吹时间为 主要参数在动物的颈总动脉上造成损伤。然后按本实验提供的高 脂饲料配方(饲料中含2%的胆固醇和6%的花生油)喂养动物不同 时间(半个月,1个月,2个月和3个月)。用数字减影血管造影(DSA) 评价血管狭窄程度;用多种染色方法评价病变血管的病理改变特 点,最后比较筛选出最佳的动物模型复制方案。实验2:按实验1 得到的建立模型的方法,另将25只新西兰白兔制成CASS模型,实 施与临床相似的CEA手术,分别于手术前、术后即刻、术后3日、 术后7日和术后21日灌注固定取材。应用VEGF免疫组化和VEGF mRNA 原位杂交的方法,评价各组动物局部动脉壁VEGF及其基因的表达 特点。 研究结果:实验1:御颈动脉平均狭窄率分别是,半月组:46.32% t 19.29%;1月组:72.80%t 19.28%;2月组:73.47%t 22.26%;3 月组:59.19%t 25.22%。御中度以上狭窄均达至80%,其中一月 组、二月组和三月组的重度狭窄湖u或接近5 0儿 病理检查证实, 随着喂养时间的延长,粥样硬化性病理改变逐渐加重:高脂喂养 半月,达多粥舱化改变的脂瓣;喂养1个月,达庄早期纤维斑 块期;喂养2个月,已属于较成熟的纤维斑块期;到3个月时,开 始由纤维斑块期向粥样斑块期过度,恻不是典型的粥样斑块。 实验2:①正常血管的内膜和中膜内均未见明显的VEGF蛋白或基因 表达。②病变血管斑块内VEGF蛋白表达呈强阳性,主要位于细胞 外基质中,偶见于泡沫细胞内;斑块中VEGF mRNA表达明显上调, 并定位于泡沫细胞。①在硼A后3天内,手术损伤性刺激和血流中 各种因子的作用尚未使平滑肌VEGF合成明显增加。④术后 1周左 右,平滑肌细鹏成和分泌VEGF增加;内皮增殖区 VEGF表辅加, 内皮细胞VEGF mRNA表达明显上调。⑤t舱正常的还是粥样硬化 改变的血管,随着内皮再生、中膜创面被覆盖,中膜中 VEGF的表 达逐渐陇,到3周时艄生内皮覆盖的中膜内VEGF基固和蛋白的 表达已不明显。 研究结论:按本实验提供的方案,动物损伤后喂养2个月即制成了 满足需要的CASS动物模型。CEA后,局部中膜平滑肌和增殖的内皮 细胞均能合成阳旺,并在术后1周左右达到高峰。若术中引入外源 性肥OF基困或蛋白,可S时哪内皮化,防止或减轻m^后再狭窄。


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