稳态噪声性听神经元损伤蜗内AD-NT3基因治疗的实验研究

【摘要】： 神经生物学研究已证实神经营养因子(NTFs)与外周听觉系统有着密切的关系，NTFs的作用不仅表现在它是听觉上皮、听觉神经元发育、成熟、增殖分化、存活的必需因子，而且对损伤后修复、残存神经元的存活和功能的重塑有重要作用。神经营养素—3(NT—3)作为神经营养因子家族成员重要之一，在内耳Corti器有表达，编码NT—3高亲和力受体trkC mRNA主要分布于螺旋神经节的分化区域，是发育中和成体动物耳蜗组织中最为重要的存活因子。然而，由于耳蜗结构的特殊性，外源性NT-3难以通过血迷路屏障到达靶部位。NT—3在体内生物半衰期较短，全身性给药难以使其在局部发挥生物学作用。如何解决这些问题对于深入研究神经营养因子在听觉神经损伤修复中的作用及开展感音神经性聋早期治疗的临床研究具有十分重大的现实意义。本研究试图应用基因导入与转染的手段，使相关的目的基因在耳蜗局部得以稳定、持久地表达相应神经营养因子，为最终解决这类问题探索一种新的途径。 为深入探讨初级听觉神经元损伤后的修复和神经营养因子对修复过程的生物学作用，本研究以成体豚鼠为对象，制备稳态强噪声性听觉神经元损伤的动物模型，建立耳蜗内Ad—NT3基因导入的实验方法，应用免疫组织化学、组织病理学、超微病理学及听觉电生理等技术，从多个层面进行观察，对噪声损伤后外周听觉系统的形态与功能改变、耳蜗内基因治疗的安全性、神经营养因子基因治疗对噪声损伤后初级听觉神经元的存活与功能修复过程的生物学作用等问题进行了综合研究。藉以探讨基因治疗在感音神经性耳聋防治中的可能作用并对其前景进行初步评价。主要结论如下： 中国人民解放军军医进修学院 硕士论义中文摘要 l．应用稳态强噪声刺激建立外周靶剥夺的实验动物模型。130dH SPI。X 5小时剂量的稳态噪声暴露可造成动物听觉上皮损害，引起蜗内 神经纤维的继发性退变。病变主要累及螺旋神经节神经元似N；NFP 免疫组化显示噪声损伤后耳蜗外周神经末梢存在变性过程：门0“引’I。 X 5 小时的噪声剂量可导致川3R、CAP严重异常，出现永久性阈移 汁”S），听觉电生理学变化与组织病理学改变相一致。 2．耳蜗内基因治疗途径的探索。采用耳蜗底周鼓阶骨壁钻IL途径向 外淋巳腔内导入AdN”l’3 R的基因。导入后的组织病理学和超微病理显 示耳蜗感觉1：皮结构无明显损伤，听觉诱发电位测试结果也表明牙入操 作本身对听力的影响较小。经耳蜗底周骨壁钻孔向鼓阶外淋巴腔内导入 HI’－：3恭b在技术卜是安全、可行的。 3．Ad－＼1y牙入耳蜗后的组织形态学和电生理学观察。腺病毒导入 ］l；7人的H：蜗组织切片术发观感染性细胞变性改变，听觉诱发电位测试 结果亦表u本实验条件下，复制缺陷型腺炯毒（Ad）对耳蜗组织的感染爿。 个进成内耳的损害。 4．八小丫卜（的转导细胞在耳蜗内分介较厂，讣可产生丫1’3蛋山。免 疫组化染色显不，从底口到顶凹均可见y【X阳性反应产物：从杀底膜到 螺旋神经竹的厂泛K域内，八小丫m能转染耳蜗内多种细胞，柯衬器支 持细胞、螺旋缘及螺旋神经节细胞均有较强的染色：表达过程可持续较 长时旧。 5．11始产性听帅经损伤蜗内基因治疗的听觉电生理观察。卢损伤后V 期实施耳蜗内＊－＼T3基H治疗，可以减轻ABR阈移程度，对整体听觉 功能什保扩作川；H蜗内 八d－丫1X 寸入能减少噪产损伤引起的C川‘－＼1 波反应闽增高和潜伏期延长，从而起到对初级听觉传入通路亢整性的保 扩l作）U。 4 中国人民解放军军医进修学院 硕士论文＿中文摘要 6．噪声性听神经损伤蜗内基因治疗对耳蜗神经纤维的影响。AdNI”3 基因的转导与表达对听觉上皮损伤后继发性蜗内神经纤维退变具有一定 的促进修复作用，NFP染色显示外周神经纤维存活维持时间较长，组织 学的存留和功能的保存相一致。