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严重烧伤患者单核细胞HLA—DR表达规律的临床与实验研究

刘静杰  
【摘要】: 目的:1、通过观察烧伤患者伤后血浆中主要促炎因子、抗炎因子水平和单核细胞HLA-DR表达率的变化,初步了解严重烧伤患者伤后免疫功能状态,为临床免疫治疗提供依据。并进一步明确HLA-DR在免疫功能中的诊断地位。 2、对比正常单核细胞与免疫麻痹单核细胞在体外对LPS、LPS+卡巴胆碱、LPS+IFN-γ刺激产生TNF-α的能力、对LPS、LPS+卡巴胆碱刺激产生IFN-γ的能力和正常单核细胞与免疫麻痹单核细胞在体外对LPS、LPS+卡巴胆碱、LPS+IFN-γ刺激下单核细胞HLA-DR的表达率的变化。进一步了解严重烧伤患者单核细胞的免疫功能状态。 3、观察抗炎药卡巴胆碱、免疫调节剂IFN-γ在体外对受到LPS攻击的单个核细胞HLA-DRmRNA及其调节基因CIITAmRNA的变化,从转录水平了解其对烧伤后免疫功能的调理作用。 方法:1、以ELISA法测定正常成人、轻度烧伤患者和中度烧伤患者伤后第3天;重度烧伤患者伤后3、7、14天;特重烧伤患者伤后3、7、14、28、42天血浆IL-6、IL-10、TNF-a水平。测定特重烧伤患者伤后7、14、28天血浆IFN-γ水平。 2、用PE-CD14和FITC-HLA-DR单克隆抗体标记血细胞以流式细胞仪测定特重烧伤患者伤后3、7、14、28、42;重度烧伤患者伤后3、7、14天;中度烧伤患者、轻度烧伤患者伤后3天和正常成人单核细胞HLA-DR表达率。 3、淋巴细胞分离液分离人血单个核细胞,分为正常对照组(HL-DR>80%)和免疫麻痹组(HLA-DR<30%),用LPS、LPS+IFN-γ、LPS+卡巴胆碱对细胞进行体外培养刺激24小时。ELISA法测定各组培养上清中TNF-α浓度和LPS、LPS+卡巴胆碱组培养上清中IFN-γ浓度。并用流式细胞仪 军医进修学院博卜论文 中文摘要 测定各组单核细胞HLA-DR表达率。相同方法刺激培养的单个核细胞,提 取细胞总叫A,以RT-PCR方法测定各组HLA-DRmRNA、CllTAmRNA的表达。 结果:l、伤后重度烧伤和特重度患者血浆几-10、IL6、TNF-口水平较正 常成人、轻中度患者明显升高,伤情越重细胞因子水平越高。随着伤情好 转,细胞因子水平下降。烧伤后患者单核细胞HLA-DR 降低,烧伤程度越 重,HLA-DR越低。 2、特重度烧伤未用胸腺肽的患者,血浆中 IFN-Y水平测不出。应 用胸腺肽的患者,血浆中 IFN-Y水平在用药后升高,在停药后较长的一段 时间内仍可维持较高水平。 3、体外培养的单个核细胞受到LPS刺激后,培养上清中TNF-a水 平增高。LPS与IFN-a或卡巴胆碱联合培养组,上清TNF-a的水平较单纯 LPS刺激组低(P<0.01)。患者单核细胞与正常单核细胞相比,产生wF- a能力降低(p<0.01)。与 IFN-v和卡巴胆碱联合培养可使 TNF-口的生成 量进一步降低(p<0.of)。 4、正常单个核细胞(HLA—DRto80%)在受到LPS刺激后可以产生 IFN-Y,卡巴胆碱可以增加 LPS刺激后单个核细胞产生 IFN-Y的能力。麻 痹的单个核细胞(HLA—DRwt 30%)的单个核细胞对刺激无明显反应。 5、正常单核细胞和麻痹单核细胞在受到LPS刺激后HLA-DR均下 降。与 IFN-Y或卡巴胆碱共同培养时可减轻其下降的程度。其中加入卡巴 月 碱后HLA-DR与单纯LPS刺激组相 *差异有显著意义。 6、正常人单个核细胞表达HLA-DRmRNA和 CllTmRNA,患者单个核细 胞表达HLA-DRmRNA和 CllTmRNA量极少。受到 LPS刺激后两个基因表达均 减少。加入 IFN-Y或卡巳胆碱,可以促进两个基因表达。 结论:1、严重烧伤打击可激活机体免疫细胞大量释放促炎因子和抗炎因 子,并引起单核细胞递呈能力受损,诱发机体兔疫失衡。 2、IFN-Y可减少单核细胞在体外受LPS刺激后TNF-Q的释放,有 减轻炎症的保护作用,但提高HLA-DR 的作用不明显。卡巴胆碱不仅对体 4 军防进修学院博上论义 中文摘要 外培养的单核细胞有抗炎作用,也能减轻单个核细胞受内毒素攻击时 HLA十R的降低程度。是一个有应用前景的药物。 3、IFN-Y和卡巴胆碱对单核细胞递呈功能的调节是在转录水平, 井与反式激活因子的表达相关。IFN-Y和卡巳胆碱不能明显促进免疫麻痹 细胞HLA-DRmRNA的表达。严重烧伤后单核细胞HLA-DR表达障碍可能发生 在转录水平。


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