休克期切痂对烫伤大鼠辅助T淋巴细胞Th1/Th2功能性极化的影响及其机制的实验研究

【摘要】： 目的：采用大鼠30％Ⅲ°烫伤模型，观察：①大鼠烧伤后及不同时机切痂后血循环中和脾脏、肠系膜淋巴结内Th1型细胞因子γ干扰素(IPN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、Th2型细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)变化的规律：②上述细胞因子mRNA在T淋巴细胞和脾脏、肠系膜淋巴结(MLN)内表达的动态改变；③烧伤大鼠血清和焦痂提取物对离体大鼠T淋巴细胞Th1／Th2型细胞因子的变化规律的影响；④相应的T淋巴细胞转化率。探讨烧伤焦痂持续存在对机体免疫功能的危害，论证休克期切痂的必要性。 方法：清洁级雄性Wistar大鼠160只，随机分为四组：A组为单纯烧伤对照组；B、C、D组均为切痂组，分别于伤后8、24、96小时一次切除焦痂移植同种异体皮封闭创面，设立烧伤前、烧伤后4、12、24、48、96、120、168小时诸时相点，各时相点n=8。在各时相点处死动物，留取血液和脾脏、肠系膜淋巴结标本并即刻提取纯化T淋巴细胞，ELISA法检测IFN-γ、IL-4，放射免疫分析法检测IL-2、IL-10蛋白水平、RT-PCR方法半定量测定IFN-γ、IL-4 mRNA表达。以烧伤大鼠血清和焦痂提取物体外刺激健康大鼠的T淋巴细胞，健康大鼠血清和正常皮肤提取物为对照，收集细胞及培养上清，测定上清内上述细胞因子水平及T细胞内IFN-γ、IL-4 mRNA的表达。用~3H-TdR(氚标记胸腺嘧啶核苷)掺入法测定T淋巴细胞转化率；免疫组化方法检测IFN-γ、IL-4在脾脏、肠系膜淋巴结和T淋巴细胞中的表达。 军医进修学院博士学位论文 中义摘耍 结果：1．烧伤后大鼠（八组）血浆中及脾脏、肠系膜淋巴结匀浆内 Th型细 胞因子 IFN－Y、IL－2和 TI。2型细胞因子几－4、IL习 0的浓度均急剧大幅上升，前 者于一l。PB即可检出，24h PB达到峰值，其后逐渐回落，伤后一周时仍高于伤前； 后者自 12h PB开始待续升高。在观察期内二者的比例逐渐接近并呈现可能发生倒 置的趋势；B、C、D组Till型细胞因子的变动幅度和变化速率以及＊ 型细胞因 子的升高幅度均小于八组。与伤前比较妥化幅度按八、D、C、B的）烦序递减。2． 烧伤后T淋巴细胞、脾脏和肠系膜淋巴结组织r卜Y、几－4YMA的表达都上调， 变化规律与各自的蛋白水平变化规律相仿：IL－4二RNA A组表达最强，其次为D 组，再次为C组，B组最弱；IFN－v mRNA表达伤后初期A组最强，至观察器结 束时 B组最强，随后为 C、D、八组。3．烧伤后大鼠 T淋巴细胞转化率的斐化：八 组伤后持续降低，伤后一周时仅为伤前水平的 1／3强，B、C、D纽则均有不同程 度的改善。而 B组优于 C组（尸－0。031），C组优于 D组（HO．015），D组与 A 组较为接近。4．离体实验显示，烧伤大鼠血清刺激T淋巴细胞令其IFN－V、IL4 IRN八表达上调、培养上清内Till与ThZ型细胞因子的浓度增力。，且也有二者比例 倒置夫衡的倾向；同时烧伤血清刺澈后T淋巴细胞转寸匕率亦明显降低。休克期切 痴大鼠血清刺激T淋巴细胞上述指标改变不明显，与伤前比较无统计学差异，非 休克期切痴大鼠血清则与烧伤大鼠血清有相近而程度较轻的刺激作用。5．烧伤焦 痴提取物体外刺激T淋巴细胞获得的结果与烧伤血清类似，正常皮肤提取物对T 淋巴细胞无明显刺澈作用。 结论： l．烧伤导致 Till型细胞因子（IFN－V、IL－2）和 ThZ型i田胞因子（IL－4、IL－10） mRNA表达迅速增强，在血循环、脾脏和肠系膜淋巴结内蛋白水平急剧升高。 2．烧伤后随时间推移，体内 m1型细胞因子含量逐渐下降、nlZ型细胞因子 含量进行性升高，H者比例相互接近，有发生＊。1／Tll2功能性极化夫去平衡的倾 向。 军医进修学院吁士学位论文 中文摘要 3．烧伤后T淋巴细胞转化率快速降低。 4．烧伤后切沥植皮能显著遏制nl和T 112型细胞因子的剧烈变化，有效缓解 Th／ThZ k调的趋势；同时改善T淋巴细胞转｛率。切痴植皮的时机对其效果有 明显影响，休克期切痴优于非休克期切痴，8小时切频组疗效优于24小时切痴组。 5．烧伤血清体外刺澈T淋巴细胞能使其产生的nil、n。2型细胞囚子大幅度增 加，切痴后的动物血清刺激强度减弱；伤后切痴越早，血清的刺激作用越弱；正 常血清对T淋巴细胞无刺激作用。 6．焦痴提取物也能诱导T淋巴细胞体外产生Thl、ThZ型细胞因子，正常皮肤 提取物完全无止匕作用。