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老年大鼠肾脏缺血/再灌注损伤诱导肾小管上皮细胞凋亡的变化特点及机制研究

乔晞  
【摘要】:研究背景:肾脏缺血是急性肾功能衰竭的常见原因,老年人对其易感性增加,但机制尚不清楚。肾缺血导致急性肾衰的原因是缺血/再灌注损伤,肾小管上皮细胞凋亡是其重要发生机制之一。机体衰老进程中也存在着细胞凋亡的失调,在生理状态下肾小管上皮细胞凋亡随增龄增加。但肾脏缺血/再灌注损伤时老年肾小管上皮细胞凋亡是否也更加明显,以及细胞凋亡在老年缺血性急性肾衰中的作用尚无报道。目的:观察老年大鼠肾脏缺血/再灌注损伤诱导肾小管上皮细胞凋亡的变化特点,及其与肾功能损伤和肾脏病理改变的关系,探讨细胞凋亡在老年缺血性急性肾衰中的作用;通过对caspase依赖的内源性凋亡(线粒体)途径和外源性凋亡(死亡受体)途径的研究以及环孢霉素A和(CsA)霉酚酸酯(MMF)对两条凋亡途径的干预,探讨老年大鼠肾脏缺血/再灌注损伤诱导的肾小管上皮细胞凋亡变化的机制。方法:老年(27月龄)和青年(3月龄)雄性Wistar大鼠按照随机区组设计的原则分别分为假手术组、缺血/再灌注损伤模型组、CsA干预组及MMF干预组。双侧肾动脉夹闭30min再灌注18h制作大鼠肾脏缺血/再灌注损伤模型。比色法测定血清肌酐(SCr)浓度:过碘酸-希夫氏碱(PAS)染色观察肾脏组织病理改变;原位末端标记(TUNEL)法及DNA电泳观察肾小管上皮细胞凋亡情况;比色法测定肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;Northern blot检测肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3mRNA表达;RT-PCR检测肾组织caspase-8、9mRNA表达;Western blot检测胞浆细胞色素c、caspase-3、8、9蛋白表达。结果:生理状态下老年大鼠SCr水平明显高于青年大鼠,肾组织可以见到病理改变;肾脏缺血/再灌注损伤时,两年龄模型组大鼠SCr均明显升高,肾脏组织病理改变明显加重,老年鼠的上述变化较青年鼠更为显著(P


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