两种异基因造血干细胞移植后嵌合体检测方法的建立和对照研究

【摘要】：异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前许多恶性血液病和一些非恶性疾病的主要治疗手段,但疾病的复发仍是影响allo-HSCT效果的主要原因。成功的移植是一个复杂的过程,移植后区分造血细胞是来源于供者还是受者很重要,对于临床判断是否植入、疾病复发以及干预性免疫治疗具有指导意义。移植后嵌合体的检测有多种方法,目前常用的是建立在DNA多态性基础上的PCR方法。其中利用短串连重复序列(STR)以及单核苷酸多态性(SNP)等进行嵌合体的检测已成为研究的热点。国外目前以荧光标记STR作为检测嵌合体的主要方法,而国内开展嵌合体检测的研究是在近几年,多以STR硝酸银染色法为主。文献对于这两种检测方法的敏感性报道不一,而关于这两种方法的检测敏感性、准确性及结果稳定性方面的对照研究报道极少。本研究以此为基础,建立了STR银染和荧光标记多重STR全自动毛细管电泳两种检测移植后嵌合状态的方法,并应用到临床。对比两种检测方法的敏感性、准确性,以选择更好的方法为临床服务。并通过移植后嵌合体动态监测结果与临床病程进展进行比较,研究嵌合体检测方法的实用性。 方法:(1)建立STR-PCR结合硝酸银染色检测嵌合体的方法。根据美国CODIS数据库,选择5个具有高度多态性STR位点和性别位点,设计并合成其特异性引物,经PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色后通过凝胶成像分析软件进行嵌合体的检测。(2)对2002年9月至2005年1月在解放军总医院行异基因造血干细胞移植的46例患者进行嵌合体的动态监测。(3)建立荧光标记多重STR毛细管电泳检测嵌合体的方法。利用ABI公司的