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骨髓干细胞动员与移植治疗心肌梗死比较

刘宏伟  
【摘要】:目的:比较粒细胞集落刺激因子(G-CSF)骨髓干细胞动员与骨髓单个核细胞移植(BMC)对兔心肌梗死的治疗作用,探讨更有效、更适用的干细胞治疗心肌梗死的方法。从G-CSF动员后的外周血中分离、培养内皮前体细胞(EPC)、间质干细胞(MSC),用5-氮胞苷(5-aza)诱导MSC向心肌细胞分化,为干细胞移植治疗心肌梗死提供新的无创性的细胞来源。 方法:将30支新西兰兔采用结扎前降支的方法复制心肌梗死模型,随机分为动员组、移植组和对照组,动员组模型复制成功后3h开始给予皮下注射G-CSF30μg.kg~(-1).d~(-1),连续使用5天。动员前后分别留少量静脉血,分离血清作常规生化检查,采用非连续密度梯度离心法分离单个核细胞(MNC)并计数。在第5天时,选其中3只动物,抽取静脉血约10ml,分离获取MNC后,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记24h,然后经静脉注入动物体内,以追踪细胞能否归巢至心肌梗死区组织及其分化状况。移植组模型制作成功后7-10天,从髂骨抽取骨髓约3-5ml,用相同的方法分离MNC并计数,选其中3只动物用Brdu标记MNC,细胞移植采用开胸直接注射的方法。心梗后1周及5周采用超声心动图(UCG)检查心脏功能变化,5周时作血液动力学测定,取心脏作常规组织学染色及免疫组织化学鉴定。从G-CSF动员后的外周血中分离、培养内皮前体细胞(EPC)、间质干细胞(MSC),MSC经5-aza作用24h,对EPC及诱导后的MSC分别进行鉴定。 结果:动员组外周血中MNC计数,动员前为(4.68±1.17)×10~6/ml,动员后为(19.65±8.28)×10~6/ml,常规生化测定动员前后除碱性磷酸酶(ALP)升高外,其它各项指标均无显著变化。移植组平均每只动物移植MNC的量平均为(4.26±0.73)×10~7/只。心梗后5周,动员组左室射血分数(LVEF)明显高于1周时(43.90±3.74%,53.41±5.04%;p0.01),移植组无变化(42.24±2.53%,43.68±4.22%;p=NS),对照组显著下降(42.13±3.59%,37.58±6.05%;p0.01)。Tei指数动员组5周时明显低于1周时(45.75±10.4%,36.41±14.37%;p0.01),移植组无变化


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