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整合子介导鲍曼不动杆菌多重耐药分子机制

童卫杭  
【摘要】:【研究背景】鲍曼不动杆菌已成为引起严重致死性院内感染重要病原菌,常表现为对多种抗菌药物耐药即多重耐药,易引起医院获得性肺炎、菌血症、泌尿系统感染、脑膜炎、软组织感染以及腹腔内感染等严重感染。特别是近年国内外报道耐碳青霉烯类多重耐药鲍曼不动杆菌,在重症监护病房、血液病房引起爆发流行,病死率高。鲍曼不动杆菌感染治疗越来越困难,临床治疗面临着严峻的挑战。因此加强对其耐药性监测,研究其耐药分子机制,对于控制和治疗鲍曼不动杆菌引起的医院内感染具有重要的现实意义。 【目的】筛选临床分离鲍曼不动杆菌中多重耐药菌株,测定其耐药表型;测定多重耐药菌株产β-内酰胺酶的表型和基因型;对临床分离鲍曼不动杆菌中含整合酶分布状况进行研究,用PCR方法测定鲍曼不动杆菌中整合酶基因及类型;测定整合子可变区耐药基因,分析整合子结构,探讨整合子阳性菌株中耐药基因对鲍曼不动杆菌耐药表型的影响。 【方法】(1)利用常规纸片扩散药敏试验从北京地区医院临床分离的82株鲍曼不动杆菌中筛选出多重耐药的菌株(至少对两种及两种以上抗菌药物耐药),采用琼脂二倍稀释法检测24种抗菌药物对82株鲍曼不动杆菌的耐药表型。(2)采用改良三维试验,PCR扩增及DNA测序等方法测定耐药菌株的AmpC酶和ESBLs、碳青霉烯酶的表型及基因型。用RAPD分型方法分析耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性,分析产酶情况不同的菌株在耐药表型方面的差异。初步探讨耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌多重耐药机制。(3)设计3类整合酶基因特异性引物(IntI1,2,3)进行PCR扩增反应和DNA测序,测定82株鲍曼不动杆菌中整合酶基因及类型,分析整合子阳性菌株在耐药表型方面的差异。(4)以整合酶阳性的菌株为研究对象,用PCR扩增和DNA测序方法测定整合子可变区基因盒,通过PCR扩增测序产物结果直接在GeneBank上进行序列比对分析,了解内插耐药基因情况,分析整合子结构。 【结果】(1)82株不动杆菌经常规生化反应和Vitek系统进一步核查鉴定,确定为鲍曼不动杆菌。6种抗菌药物纸片药敏试验结果显示,有68株细菌为


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