脂肪间充质干细胞移植治疗犬心肌梗死后心力衰竭的实验研究

【摘要】：目的:探索犬脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分离、培养的方法;并证明ADMSCs在5-氮杂胞苷(5-aza)诱导下可分化为心肌细胞;探讨同种异体移植ADMSCs在心肌梗死区存活并分化为心肌细胞的情况及对犬心肌梗死后心功能的影响;初步观察ADMSCs移植可否改善犬心肌梗死后心功能及其可能机制。为心肌细胞成形术提供移植干细胞新的种子来源,为临床应用ADMSCs移植治疗急性心肌梗死后心力衰竭提供实验与理论依据。 方法 (1)ADMSCs的分离、培养与鉴定:无菌条件下取犬腹部皮下组织,采用Ⅰ型胶原酶消化法及贴壁法进行分离培养;取第3代细胞,以磷酸盐缓冲溶液(PBS)为空白对照,进行CD44、HLA-DR、Ⅷ因子表面抗原的免疫细胞化学鉴定。(2)ADMSCs的体外诱导:对第3代细胞行5-aza诱导,于第7d、14d、21d和28d时,观察细胞形态变化,并以PBS为空白对照,用免疫细胞化学方法鉴定心肌细胞表面特异抗原cTnT的表达情况。(3)ADMSCs治疗心肌梗死后心力衰竭:将杂种犬随机分为3组,对照组,ADMSCs移植组和5-aza诱导后ADMSCs移植组,分别给予IMDM培养基、DAPI标记的ADMSCs和诱导后DAPI标记的ADMSCs心外膜下移植治疗;于移植前、移植后1周及移植后4周行超声心动图检查,移植后4周行血流动力学检查;并处死动物取心脏标本,分别行免疫荧光化学观察移植细胞存活、分化情况及免疫组织化学cTnT检测、测定血管密度和胶原容积分数,计数凋亡细胞数。 结果 (1)犬脂肪组织中含有大量长梭形细胞,免疫化学鉴定显示与空白对照相比较CD44抗原呈阳性反应,HLA-DR和Ⅷ因子抗原均为阴性反应。(2)5-aza诱导后细胞排列方向渐趋一致,部分细胞聚集成团。与空白对照比较21d后多数细胞免疫细胞化学染色显示心肌肌钙蛋白T呈阳性反应。(3)