收藏本站
收藏 | 论文排版

乙型肝炎病毒X蛋白反式调节作用的研究

李进  
【摘要】:乙型肝炎病毒(HBV)感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且是肝纤维化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的主要病因。病毒基因组编码的蛋白通过反式调节宿主肝细胞基因组的表达,调控肝细胞的生长,可能是HBV致病(癌)的重要分子机制之一。HBV基因组具有4个主要的开放读码框架(ORF),分别命名为S、C、P、X区,其中X区编码154个氨基酸残基组成的17.5 kDa的产物-HBx。HBx是一种具有反式调节作用的病毒蛋白质,关于其反式调节作用,来自不同研究小组的实验结果甚至相互矛盾,因此,HBx在病毒复制和发病机制中的确切作用还有待进一步阐明。利用寡核苷酸基因芯片技术对HBx蛋白反式调节靶基因进行新的开拓,全面了解HBx蛋白反式调节作用的靶基因,有助于阐明HBV感染的部分分子生物学机制。 本课题首先应用常规分子生物学技术构建HBx蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)-X,并将构建好的重组质粒瞬时转染人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞,以空载体为平行对照。应用寡核苷酸基因芯片技术对HBx反式调节的靶基因进行筛选,同时结合生物信息学技术对差异表达的基因进行分析。在筛选的21,329条基因中,有426条差异表达的基因,其中168条基因表达上调,258条基因表达水平下调,这些基因包括许多与细胞生长调节、细胞凋亡、信号转导、免疫反应、物质代谢、细胞分裂周期、肿瘤发生和转移等相关的基因,还包括一些未知功能的新基因,其中之一命名为HBx蛋白反式激活基因11(XTP11)。 为进一步研究细胞中表达的HBx蛋白对抑癌基因p53的调节作用,我们利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3.1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果显示,克隆的p53启动子序列具有激活下游基因转录的活性,当pCAT3-p53p与pcDNA3.1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降;进一步采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测表明,瞬时转染了pcDNA3.1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。说明HBx蛋白在转录水平上反式抑


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 纪冬;成军;郭江;刘妍;陈国凤;王琳;;应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的下调基因[J];中华老年多器官疾病杂志;2005年04期
2 高学松;成军;甄真;郭江;张黎颖;陶明亮;;应用抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒DNAPTP1的反式调节基因[J];世界华人消化杂志;2005年19期
3 武会娟;成军;张丽娟;蓝贤勇;伦永志;郭江;毛羽;罗军;;应用抑制性消减杂交技术筛选HBeAg蛋白结合蛋白E36的上调基因[J];医学分子生物学杂志;2006年05期
4 张黎颖,成军,刘妍,郭江,黄燕萍,吴顺华,吴煜,邵清;应用抑制性消减杂交技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因[J];中西医结合肝病杂志;2005年03期
5 陶明亮;成军;王春花;郭江;袁菊;靳亚平;毛羽;;HCV p7蛋白反式调节新基因3及其剪切体克隆化和生物信息学分析[J];世界华人消化杂志;2006年06期
6 成军;刘妍;洪源;王建军;杨倩;;羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式激活作用的研究[J];世界华人消化杂志;2003年08期
7 刘妍,成军,纪冬,张黎颖,郭江,王琳,李克,张玲霞;丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6的反式调节基因研究[J];军医进修学院学报;2005年01期
8 刘妍;成军;陆荫英;李克;;乙型肝炎病毒蛋白反式激活基因的研究[J];世界华人消化杂志;2002年02期
9 李伯安;侯俊;何卫平;戚扬;迟舒萍;赵军;程云;;乙型肝炎病毒E抗原肝细胞作用蛋白AK026018表达谱芯片的研究[J];中华实验和临床病毒学杂志;2006年02期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张黎颖;成军;邓红;刘妍;王琳;;丙型肝炎病毒非结构蛋白2反式调节基因NS2TP的克隆化研究[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
2 陶明亮;成军;王春花;郭江;袁菊;毛羽;靳亚平;;丙型肝炎病毒p7蛋白反式调节新基因p7TP3及其剪切体克隆化和生物信息学分析[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
3 陶明亮;成军;王春花;郭江;袁菊;靳亚平;毛羽;靳亚平;;丙型肝炎病毒p7蛋白反式调节新基因p7TP3及其剪切体克隆化和生物信息学分析[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
4 曲建慧;成军;徐东平;钟彦伟;刘妍;张玲霞;;干扰素α作用于HepG2细胞后上调表达基因的筛选[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
5 郭江;成军;赵龙凤;纪冬;高学松;刘妍;张黎颖;戴久增;;应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HCV FTP2的反式调节基因[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
6 黄燕萍;成军;张树林;王琳;张黎颖;刘妍;;应用抑制性消减杂交技术筛选FBP2蛋白的反式调节基因[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
7 黄燕萍;成军;张树林;王琳;张黎颖;刘妍;杨瑗;蔺淑梅;白桂芹;戴久增;高学松;;应用抑制性消减杂交技术克隆筛选丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2反式调节基因[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年
8 王丹琼;郭江;成军;张健康;张黎颖;洪源;赵龙凤;伦永志;;应用酵母双杂交技术筛选白细胞cDNA文库与PS1TP2结合蛋白基因[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
9 袁菊;郭江;成军;陶明亮;蓝贤勇;洪源;靳亚平;毛羽;;丙型肝炎病毒p7蛋白反式调节基因p7TP2的克隆化及生物信息学分析[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
10 成军;郭江;洪源;王春花;张黎颖;邓红;;构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS2反式调节基因消减文库[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈跃军;表皮生长因子受体反式调节G蛋白偶联受体功能的研究[D];复旦大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 郭江;丙型肝炎病毒p7蛋白反式调节作用的研究[D];山西医科大学;2005年
2 陶明亮;应用抑制性消减杂交技术筛选p7TP3剪切体1反式激活基因[D];西北农林科技大学;2007年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 本报记者 靖九江;探寻病毒性肝炎的未知世界[N];中国医药报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978