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SARS冠状病毒的临床检测和基因变异分析研究

徐东平  
【摘要】:本研究旨在研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者临床标本中SARS冠状病毒(SARS-CoV)RNA和特异性抗体的检出特点、SARS-CoV的体外培养分离特点和病毒棘突蛋白编码基因(s基因)和核衣壳蛋白编码基因(N基因)的序列变异特点,以期为SARS的早期诊断、合理预防、以及对深入了解SARS-CoV的病毒学特点和SARS的发病机制研究提供帮助。 1、SARS患者临床标本中SARS-CoV RNA及特异性抗体的检测 检测了54例SARS患者486份临床标本(血浆、全血、痰、尿、粪便)中的SARS-CoV RNA,根据BJ01株SARS-CoV序列(GenBank序列号:AY278488)设计了N基因片段扩增引物,结合世界卫生组织(WHO)推荐的R基因片段扩增引物,显著提高了用巢式反转录多聚酶链反应(nested RT-PCR)对SARS-CoV RNA的检出率,在51.9%(28/54)的患者中检测到病毒RNA。同时对病毒RNA和抗SARS-CoV特异性抗体的动态检测表明,SARS发病前2周SARS-CoV RNA阳性率高于抗体阳性率,对SARS早期确诊有一定意义。 2、SARS患者粪便、尿液中SARS-CoV的培养鉴定 用VeroE6细胞对12例患者的21份粪便和尿液标本进行了培养分离,用盲传法在16份SARS-CoV RNA阳性标本中,有10份标本培养分离到了活病毒,其中1份尿液和2份粪便分别采自3例发病时间28 d(29-36 d)的恢复期患者,提示SARS恢复期患者排泄物仍可能具有传染性。 3、最早传入北京地区的SARS-CoVS基因全序列克隆 用从北京地区首批发现的1例SARS患者咽拭子接种细胞培养上清的RNA为模板,通过巢式RT-PCR分6个片段扩增出了SARS-CoVS基因全序列。用分步重叠PCR连接、克隆了s基因全片段,序列分析表明克隆基因与BJ01株SARS-CoVS基因序列一致,为S基因功能和疫苗研究提供了基础。


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