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SARS患者临床标本中脊髓灰质炎病毒及呼肠病毒的研究

孙颖  
【摘要】:严重急性呼吸综合征(SARS)作为一种新发传染病,2003年4月WHO已正式宣布SARS-冠状病毒(SARS-CoV,SARS Coronavirus)是导致SARS的病原体。然而2003年军事医学科学院微生物流行病研究所却从北京第一例确诊SARS患者及其母亲的咽拭子标本中分离到了呼肠病毒,在我们进一步研究呼肠病毒的基因序列时,却意外的在标本中检测到了脊髓灰质炎病毒。为了进一步研究SARS的病原学,我们采用细胞培养法、RT-PCR、中和试验、血清学检测等方法对SARS患者发病时及痊愈2年后的临床标本进行呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒的分离鉴定。 在SARS发病时,我们利用HEp-2细胞对4份确诊SARS患者的咽拭子标本进行病毒分离,接种后细胞均在培养第3d开始出现细胞病变效应。采用随机引物RT-PCR对细胞培养上清液进行了病毒核酸扩增,结果在4份标本中扩增出了脊髓灰质炎病毒,3份标本中扩增到了呼肠病毒,4份咽拭子标本接种HEp-2细胞后,细胞病变均不能被呼肠病毒1、2、3型抗血清中和,但却可以被含有1型脊髓灰质炎病毒的混合标准抗血清中和,中和试验结果显示这4份咽拭子标本中均含有Ⅰ型脊髓灰质炎病毒,而所扩增到的呼肠病毒可能是一种新型的呼肠病毒。采用脊髓灰质炎病毒和呼肠病毒特异性引物RT-PCR方法,对上述4份细胞培养上清液进行扩增,并将PCR产物克隆到T-easy载体后测序,测序结果显示在4份标本中均检测到了脊髓灰质炎病毒,而在3份咽拭子标本中检测到了呼肠病毒。为了进一步明确脊髓灰质炎病毒在SARS患者体内存在的真实状态,我们采用特异性引物RT-PCR的方法对25例确诊SARS患者的临床标本进行检测,结果Ⅰ型脊髓灰质炎病毒阳性率为60%(15/25),呼肠病毒阳性率为18.2%(8/25);而对照组中的25例患者,脊髓灰质炎病毒的阳性率仅为4%(1/25),呼肠病毒阳性率为0(0/25)。脊髓灰质炎病毒的阳性率经统计学分析,两组之间具有显著性差异(P0.01)。测序结果显示这些检测到的脊髓灰质炎病毒与Ⅰ型脊髓灰质炎病毒具有99%的同源性,但在480nt和2795nt两个重要的减毒位点上均发生了回复突变;我


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