收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

抗舌癌特异性角蛋白单克隆抗体的制备

席庆  
【摘要】:口腔粘膜鳞状细胞癌的发生是一个多因素的过程,角蛋白的表达不仅与部位有关,而且与细胞类型和分化程度有关。角蛋白被证明是发现局部侵袭、微小转移和远处转移非常好的标记物,角蛋白不仅可以对肿瘤早期发现和鉴别诊断,还可以对预后进行评价。目前为止,国内外都还没有对口腔颌面部肿瘤角蛋白谱的具体而详尽的分析工作,目前也还没有国内自主生产和商品化的角蛋白相关单克隆抗体。因此,系统分析研究口腔颌面部鳞状细胞癌角蛋白谱的变化,并且对特异性角蛋白组进行提取分离和鉴定,进行单克隆抗体的制备和筛选,对于进一步探索检测早期癌变、转移病灶乃至生物治疗鳞癌都是极为重要的。 基于以上目的,本实验进行了以下四部分实验的研究。 实验一 舌高分化鳞状细胞癌角蛋白谱的分析 目的:研究口腔舌高分化鳞状细胞癌角蛋白谱的特点。方法:舌高分化鳞状细胞癌及正常舌体组织活检标本,提取角蛋白,进行SDS-PAGE电泳和利用免疫印迹(Western-blot)杂交方法对比研究舌高分化鳞状细胞癌及正常舌体组织中角蛋白谱的表达。结果:舌高分化鳞状细胞癌中出现了单层角蛋白上皮如CK18、19。结论:舌高分化鳞状细胞癌变异性表达的CK18、19和CK10的不表达,是舌癌发生演变过程的结果,舌癌角蛋白谱的变化与肿瘤的变化有密切关系,可以作为研究肿瘤生物学特征的重要指标。 实验二 舌癌角蛋白组的分离和纯化 目的:将舌癌中的角蛋白组提取出来,作为下一步进行单克隆抗体制备的抗原。方法:在利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹(Western-blot)杂交方法确定舌癌组织中角蛋白谱的表达位置后,利用跑大胶的方法大量提取舌癌角蛋白并进行鉴定。结果:成功提取了大量的舌癌角蛋白组群,鉴定后分子量区间符合角蛋白。结论:利用电泳法大量提取了角蛋白,可以作为下一阶段单克隆抗体的抗原使用。 实验三 抗舌癌角蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 目的:用人高分化舌鳞状细胞癌角蛋白组群为抗原,制备了抗舌癌角蛋白单克隆抗体并对单抗的特异性进行鉴定。方法:提取和纯化的舌癌角蛋白免疫小鼠,利用小鼠B淋巴细胞杂交瘤技术,间接免疫酶标法筛选阳性克隆,抗体分泌检测和亚克隆,建立了五株稳定分泌抗舌癌角蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并进行抗角蛋白单克隆抗体的亚类及特异性鉴定。结果:融合细胞共384孔,融合率95%,共获得5株抗角蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,用终末稀释法克降化三次,阳性率达100%,分别命名为Lck1-5,IgG亚类测定属


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 肖宁新,黄耀全,石胜;p63和CK5/6在鳞癌组织中的表达及其鉴别诊断价值[J];中国基层医药;2005年04期
2 潘敏鸿;黄文斌;周晓军;;具有基底细胞样表型的乳腺导管原位癌[J];临床与实验病理学杂志;2006年03期
3 孙鹏;陈尚武;王子卫;刘德贵;杨勇;;胃癌阴性淋巴结微转移检测的临床意义[J];西南国防医药;2007年01期
4 魏杨辉;黄耀;;CK-19在甲状腺乳头状癌及甲状腺乳头状增生患者外周血中的表达[J];临床和实验医学杂志;2009年09期
5 于游;王灿;彭力;吴强;韩继明;李雅嘉;;结直肠癌淋巴结微转移的临床研究[J];中国普通外科杂志;2009年10期
6 阎新文;用电融合技术产生抗细胞角蛋白单克隆抗体杂交瘤克隆[J];国际免疫学杂志;1986年01期
7 黄威权;王文超;;中间丝与肿瘤的鉴别诊断[J];国际肿瘤学杂志;1987年01期
8 戴为东,刘子君,胡瑞德,吴惠茜;膀胱癌癌细胞角蛋白和癌胚抗原的免疫组化观察[J];中山大学学报(医学科学版);1988年02期
9 苏长青,杨光霖,董聿明;胃癌细胞角蛋白和纤维连接蛋白的免疫组织化学及免疫电镜观察[J];安徽医科大学学报;1991年04期
10 陶光实,张志胜,刘毅智;HER-2/neu及细胞角蛋白在卵巢上皮性肿瘤原发灶和转移灶中表达的检测及临床意义的研究[J];现代妇产科进展;1998年02期
11 陈春莲,邓仲端,周晟;前列腺特异抗原和高分子量角蛋白单克隆抗体免疫染色法的改进及其应用价值[J];华中科技大学学报(医学版);2002年03期
12 刘逸,揭志刚,秦克旺,陈江,黄松,李映良;PN_0胃癌淋巴结微转移的检测及其预后意义[J];实用癌症杂志;2003年06期
13 周文策,李玉民,张煦,李汛,曹农,陈昊,孟文勃,张磊;细胞角蛋白7、18、19在壶腹周围癌淋巴结微转移灶的检测及临床意义[J];消化外科;2005年04期
14 陈瑾;贾忠;封光华;贺冠海;罗中尧;蔡阳;谢琦;方欣;;次级淋巴组织趋化因子检测胃癌淋巴结微转移[J];中国肿瘤;2006年06期
15 Sasaki M.;Fujii T.;Y. Nakanuma;赵菊辉;;黏蛋白核心蛋白和细胞角蛋白在源于胆管上皮内瘤和胆管内乳头状瘤的肝内胆管癌的不同表达形式:110例肝内胆管结石的免疫组化研究[J];世界核心医学期刊文摘(胃肠病学分册);2006年05期
16 贺海燕;张淼;李燕;孙琪;李永红;;细胞角蛋白AE_1、AE_3和PCNA、CEA在甲状腺滤泡癌诊断中的价值[J];宁夏医学院学报;2006年05期
17 张珊珊;吴广平;赵雨杰;王绍成;宗志宏;王恩华;;肺癌患者胸腔积液中CK19 mRNA的转录表达及临床意义[J];中国肺癌杂志;2007年03期
18 李峥嵘;;子宫内膜活检在宫内孕及宫外孕中的诊断价值[J];临床心身疾病杂志;2008年02期
19 金文波;周乃康;郑梦利;祁彦君;马连君;;食管癌患者外周血CK20-mRNA的表达及意义[J];实用医院临床杂志;2009年03期
20 刘建光;杨进益;魏伟;;联合检测尿细胞角蛋白19、核基质蛋白22、存活素对膀胱癌早期诊断的价值[J];中外医疗;2009年27期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 蔡丽敏;尤德渊;马烈;尤海燕;;鲍温病皮损中p53蛋白与细胞角蛋白的免疫组化对比分析[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
2 吕宁;薛丽燕;宋咏梅;任立群;童彤;罗巍;董立佳;管向军;邹霜梅;郑闪;毕蕊;温芃;何祖根;詹启敏;;成束蛋白、细胞角蛋白14在食管鳞癌中的表达[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年
3 蔡文品;吴惠洁;陈洁;;非酒精性脂肪性肝病患者血清细胞角蛋白18片段水平的变化[A];2011年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2011年
4 李敬;谷玲;张华力;蔡新霞;张延军;;细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)检测对肺癌临床诊断价值的研究[A];2003年全国医学影像技术学术会议论文汇编[C];2003年
5 林莺莺;陈燕;胡敏华;陈岩松;;CEA和细胞角蛋白21在非小细胞肺癌中的诊断意义[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
6 耿宁;班宇;陈宇;田鲲;暴冬梅;章卫平;;细胞角蛋白在钙化囊肿型牙源性肿瘤、牙源性影细胞瘤和牙源性影细胞癌中的表达[A];中华口腔医学会第七届全国口腔病理学术会议论文摘要汇编[C];2006年
7 白荣献;张小艳;王庶;黄金明;李光兴;;酯交换法合成碳酸二苯酯的分离和纯化工艺研究[A];湖北省化学化工学会2006年年会暨循环经济专家论坛论文集[C];2006年
8 黎相照;李林;申洪;;微波解冻法对冷冻组织细胞角蛋白免疫组化检测影响的实验研究[A];中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年
9 孙晓庆;付小兵;孙同柱;顾小曼;陈伟;盛志勇;;不同发育阶段人皮肤β1整和素及细胞角蛋白K19表达特征及其与创面修复结局的研究[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
10 秦超;莫雪安;陆锐;孙圣刚;童萼塘;;免疫磁珠法分离和纯化重症肌无力患者骨髓CD_(34)~+造血干细胞[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 席庆;抗舌癌特异性角蛋白单克隆抗体的制备[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
2 刘冉;细胞角蛋白的单克隆抗体制备及其免疫分析方法的建立和初步应用[D];中国协和医科大学;2000年
3 耿宁;牙源性钙化囊肿临床病理和分子病理研究[D];四川大学;2007年
4 任富成;抗西洋参病原真菌蛋白的分离、纯化及其基因的合成和在大肠杆菌中的表达[D];中国协和医科大学;1997年
5 孔祥永;人胎儿肺上皮细胞的发育分化及其干细胞的初步鉴定[D];第一军医大学;2004年
6 张建平;肝卵圆细胞、肝脏局部微环境改变及Wnt5a表达与肝癌形成、转移的初步研究[D];山东大学;2009年
7 郭永峰;人表皮细胞去分化的实验研究[D];中国医科大学;2007年
8 宋平平;非小细胞肺癌血行微转移以及基因多态性的相关研究[D];山东大学;2013年
9 谷峰;Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用[D];天津医科大学;2002年
10 陈磊;Barrett食管的内镜与组织学诊断及APC治疗的临床研究[D];第三军医大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 付勇;肝细胞癌细胞系的细胞角蛋白异常表达及层粘连蛋白对细胞角蛋白19表达的诱导[D];第四军医大学;2001年
2 黄纯;内皮抑素联合NP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效与循环血管内皮细胞数量的相关性研究[D];天津医科大学;2005年
3 许先国;膀胱移行细胞癌尿脱落细胞中细胞角蛋白-20/19基因表达研究[D];浙江大学;2001年
4 凤敏华;细胞角蛋白-20单克隆抗体制备及在大肠癌检测中的初步应用研究[D];苏州大学;2010年
5 夏丽梅;细胞角蛋白和P53在子宫内膜癌表达的意义[D];青岛大学;2005年
6 武艳;细胞角蛋白在乳腺导管内增生性病变中的表达及意义[D];吉林大学;2007年
7 罗灿;检测直肠腺癌远端播散及细胞角蛋白的临床意义[D];华中科技大学;2006年
8 戚莉莉;微囊藻毒素的光降解研究[D];江南大学;2008年
9 李中琦;三阴性乳腺癌中角蛋白5/6和雄激素受体的表达研究[D];浙江大学;2008年
10 杨丽萍;巢式RT-PCR技术在检测肺癌患者微量转移癌细胞中的临床应用研究[D];郑州大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吕庆福;中药制药必须走分离和纯化技术道路[N];中国中医药报;2004年
2 吴一福;CK20是理想的膀胱肿瘤标记物[N];中国医药报;2006年
3 吴一福;听囊细胞体外培养获成功[N];中国医药报;2006年
4 齐军;怀疑肺癌应查哪些肿瘤标志物[N];健康报;2005年
5 王茂;怀疑“肺癌”需做的化验[N];农村医药报(汉);2006年
6 本报记者 金鹂;诺华携手上海植物所 加速中药化合物研发[N];中国高新技术产业导报;2002年
7 衣晓峰 孙理;微转移是大肠癌术后转移罪魁[N];健康报;2007年
8 衣晓峰 靳万庆 本报记者  孙理;大肠癌患者病期精确判断有依据[N];中国中医药报;2007年
9 衣晓峰;陈英云;1型糖尿病治疗获重大突破[N];中国医药报;2004年
10 张中桥;发现治疗乳腺癌转移的新作用靶点[N];中国医药报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978