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大鼠下颌骨成骨细胞对格列本脲和胰岛素的转运

王威  
【摘要】: 在糖尿病的药物治疗中,选择合适的药物种类以及给药方式一直受到大家的广泛关注。为了减少全身用药的副作用,局部给药越来越多。刘洪臣等还提出了人工种植体给药系统以及根管全身给药的概念。为了了解人工种植体给药系统以及根管全身给药在糖尿病治疗中是否存在局部以及全身效果,我们研究了成骨细胞对格列本脲、胰岛素这两种常用降糖药物的跨膜转运。本实验分为两部分: 实验一:大鼠下颌骨成骨细胞的原代培养 目的:探讨高效的原代成年大鼠下颌骨成骨细胞培养方法,为进一步的实验研究奠定基础。方法:将4-6周SD成年大鼠处死并取出下颌骨,剪碎,用改良的酶消组织块培养法培养细胞,通过相差显微镜观察,用碱性磷酸酶染色、骨钙素免疫荧光染色和钙结节染色等方法对所获得的细胞进行鉴定。结果:所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶染色、骨钙素染色和钙结节染色均呈阳性。结论:改良的酶消组织块培养法可获得大量且纯的下颌骨成骨细胞,所培养的细胞具有典型的成骨细胞形态和功能,可为进一步研究提供合适的实验对象。 实验二:成骨细胞对格列本脲及胰岛素的转运 目的:研究成骨细胞对格列本脲和胰岛素的跨膜转运,为种植体全身给药提供实验依据。材料与方法:将MC3T3-E1和大鼠MO分别与含有格列本脲和胰岛素的磷酸盐缓冲液(PBS)共同孵育1、5、10、15、20、30、45分钟后,收集细胞,超声波破碎,用高效液相色谱法测定裂解液中的药物含量,用考马斯亮蓝法测定细胞蛋白总量。用细胞内药物含量与细胞蛋白的比值作为观察药物转运量的检测指标。结果:实验组下颌骨成骨细胞(Mandibular Osteoblasts, MO)和 MC3T3-E1细胞内均可测到格列本脲的存在。MC3T3-E1转运格列本脲的量与药物的浓度及药物的孵育时间有关。在同一时间点,加药浓度高时,转运的药量更大,两种浓度之间存在显著性差异(P<0.05)。随着时间的增加,胞内药量不断增加,尤其是在0-3分钟之间增加幅度较大。20分钟后细胞内药量开始下降。MC3T3-E1细胞在100ug/ml的药物浓度下对格列本脲的转运明显高于MO细胞,二者之间存在显著性差异(P<0.01)。100μg/ml胰岛素孵育下各时间点成骨胞内均不能检出药物存在。结论:1.成骨细胞可以跨膜转运格列本脲进入细胞内;2.细胞内药物的转运量呈现药物孵育浓度依赖性和时间依赖性;3.在100ug/ml的药物浓度下,未能检测到成骨细胞对胰岛素存在跨膜转运;4.高效液相色谱法测量稳定、分离度好、灵敏度、准确度、精密度高,可以用于细胞内上述药物含量的检测。


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