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鞘氨醇激酶基因转移预防术后肠粘连的实验研究

郭强  
【摘要】: 目的:腹腔间皮层在预防肠粘连发生过程中发挥重要作用,而促进间皮层损伤修复的多种细胞因子可能预防术后肠粘连的发生。细胞信号转导分子是生长因子功能的执行分子。鞘氨醇激酶(SPK1)是调控多种细胞增殖、迁移重要的信号分子。本研究的目的是探讨SPK1是否能修复损伤的间皮层,预防术后腹膜粘连的发生。 方法:分离和培养大鼠腹腔间皮细胞。免疫组化染色结果表明,分离培养的间皮细胞表达Keratin和Vimentin等间皮细胞特有的表面分子。RT-PCR的结果显示,间皮细胞表达SPK1及S1P的受体。细胞划痕实验检测间皮细胞的迁移,MTT法检测了腺病毒介导SPK1基因转移对间皮细胞增殖的影响,发现高表达SPK1基因的间皮细胞的增殖能力明显高于对照细胞。[γ-~(32)P]ATP掺入法检测细胞SPK酶活性。用无菌干纱布及手术刀损伤大鼠回盲部和子宫角浆膜层,建立了盲肠擦伤和子宫角刮伤诱发肠粘连的大鼠实验模型。在该模型中,对照组70%-80%的大鼠发生Ⅲ度以上肠粘连。分别将重组腺病毒Ad-GFP和Ad-SPK1涂抹于模型大鼠腹腔浆膜层,14天后,处死大鼠,评价粘连形成情况。 结果:腺病毒能有效介导GFP和SPK1基因在腹腔浆膜层细胞中表达。腺病毒介导的SPK1基因转移能增加间皮细胞内SPK活性,促进间皮细胞增殖和迁移。粘连评分结果,大鼠回盲部粘连模型:对照组和Ad-SPK1组的粘连中值分别为2.6和0.975,大鼠子宫角粘连模型:对照组和Ad-SPK1组的粘连中值分别为1.275和0.275。两种模型中Ad-SPK1组的粘连平均分值明显低于对照组(P<0.001)。 结论:SPK1基因转移能够促进腹腔间皮细胞的增殖和迁移,并有效预防术后肠粘连的发生。该研究有望为预防术后肠粘连提供一种新的策略。


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