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一种新型的清醒状态血管源性头痛大鼠模型的建立与鉴定

董钊  
【摘要】: 目的: 1.比较频率、脉宽、电压三种参数电刺激上矢状窦对大鼠硬脑膜血流量的影响。 2.观察电刺激上矢状窦旁后大鼠硬脑膜血流量的变化以及舒马普坦对其的影响。 3.建立清醒状态血管源性头痛大鼠模型,观察不同频率电刺激上矢状窦旁硬脑膜后大鼠的行为学表现。 4.观察吗啡对血管源性头痛大鼠模型行为学表现的影响。 5.观察电刺激上矢状窦旁硬脑膜对大鼠血浆CGRP和SP的影响。 方法: 1.使用L_9(3~4)正交表,采用正交实验设计确立电刺激参数为频率、脉宽、电压,每个因素各分为三个实验水平,分别是1Hz、5Hz、30Hz,250μs、500μs、1000μs和3V、6V、9V。暴露大鼠上矢状窦旁硬脑膜,按照正交表的刺激参数组合顺序刺激硬脑膜,激光多普勒血流量图像仪测定硬脑膜血流量,比较不同组合的相对血流量。 2.18只大鼠随机分为对照组、电刺激组和舒马普坦组,暴露大鼠上矢状窦旁硬脑膜,电刺激组和舒马普坦组以30Hz、6V和250μs的刺激参数行电刺激,对照组行假刺激,激光多普勒血流量图像仪测定硬脑膜血流量,比较每组大鼠的相对血流量。 3.83只大鼠随机分为8组,均于上矢状窦旁硬脑膜安装并固定电极,3天后进行实验;对照组手术后行假刺激,其余7组分别以1Hz、2Hz、5Hz、10Hz、20Hz、50Hz和100Hz的方波电流行电刺激,观察各组大鼠的行为学表现;根据不同类型的行为学表现确定加权后的大鼠头痛评分。 4.40只大鼠随机分为生理盐水组、1mg吗啡组、2mg吗啡组和4mg吗啡组,均于上矢状窦旁硬脑膜安装并固定电极;术后3天以2~5mA、20Hz、250μs的参数行电刺激,比较不同组大鼠的行为学表现。 2.13只大鼠随机分为对照组和刺激组:对照组行假刺激,电刺激组以20Hz、4mA和250μs的参数电刺激上矢状窦旁硬脑膜,使用放射免疫法比较血浆CGRP和SP的浓度。 结果: 1.三种刺激参数对硬膜血流量的影响由大到小依次为频率、脉宽、电压,只有频率对硬膜血流量的影响有统计学意义(P=0.035),而脉宽(P=0.259)和电压(P=0.293)对硬膜血流量的影响无统计学意义。 2.对照组、电刺激组以及舒马普坦组的相对血流量分别为(2.61±4.43)%、(15.49±5.65)%和(-0.35±5.08)%,三组间有统计学意义(P<0.01);电刺激组分别与对照组及舒马普坦组行两两比较后均有统计学意义(均P<0.01);对照组与舒马普坦组比较无统计学意义。 3.1)不同频率刺激组的刺激强度无统计学差异(P=0.737); 2)电刺激清醒状态模型大鼠可出现节律性抖动头部、过度理毛、甩头和扭头4种行为学表现,其中节律性抖动头部和头痛不相关; 3)对照组和1Hz组大鼠未发现过度理毛动作,2 Hz、5Hz、10Hz、20Hz、50Hz和100Hz各组的过度理毛时间分别为6.5(0~37.5)s、115.5(61~135)s、130(45~177)s、150(89.75~221.50)s、5(0~6.25)s和0(0~20.5)s,组间差异有统计学意义(P<0.001)。 4)对照组、1Hz组和2Hz组大鼠未发现甩头和扭头动作,5Hz、10Hz、20Hz、50Hz和100Hz各组的甩头和扭头动作分别为0(0~1.25)次、7(1~12)次、10(7.25~14.75)次、4(2~6)次和2(1~5.5)次,组间差异有统计学意义(P<0.001)。 5)对照组、1Hz、2 Hz、5Hz、10Hz、20Hz、50Hz和100Hz各组的头痛评分分别为0、0、0.25(0~0.5)、2(0.875~2.5)、4(2.5~4.5)、5(3.5~6)、1.75(1.375~2.5)和1.5(1~2.5),组间差异有统计学意义(P<0.0001)。 4.1)生理盐水组、1mg吗啡组、2mg吗啡组、4mg吗啡组的过度理毛时间分别为102(77.5~147.5)s、30.5(17.5~64.75)s、23(2~60.25)s和5(0~28.75)s,组间差异有统计学意义(P=0.0011); 2)生理盐水组、1mg吗啡组、2mg吗啡组和4mg吗啡组的甩头扭头次数分别为13.9±9.8、11.9±10.2、3.8±3.4和1.8±1.4,组间差异有统计学意义(P=0.012); 3)生理盐水组、1mg吗啡组、2mg吗啡组和4mg吗啡组的头痛评分分别为5.1±2.2、3.9±2.8、1.8±1.2和1.1±0.8,组间差异有统计学意义(P=0.014)。 5.对照组和电刺激组的血浆CGRP浓度差异有统计学意义(50.60±7.16vs.42.20±4.82,P=0.029),而血浆SP浓度差异无统计学意义(308.59±43.07 vs.264.60±60.28,P=0.165)。 结论: 1.频率是电刺激大鼠上矢状窦旁建立血管源性头痛模型的三种参数中影响硬膜血流量的最主要因素。 2.电刺激上矢状窦旁能增加大鼠硬脑膜血流量,舒马普坦对其有抑制作用。 3.清醒状态血管源性头痛大鼠模型可出现过度理毛、甩头和扭头三种头痛相关行为学表现;20Hz是建立此模型较适宜的刺激频率。 4.吗啡能够减少血管源性头痛大鼠模型的过度理毛时间及甩头扭头次数,两者存在量效关系。 5.电刺激上矢状窦旁硬膜能够降低大鼠血浆CGRP浓度,而SP浓度无明显变化。


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