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乙型肝炎病毒HBsAg基因稳定转染Chang-Liver肝细胞系差异表达蛋白的研究

牟劲松  
【摘要】: 乙型肝炎病毒(HBV)感染是严重影响我国人民健康的重要传染病。可引起急性、慢性肝炎、肝硬化,并与肝癌的发生有密切的关系。目前,对于具体的HBV致病(癌)机制尚不十分明确。其中,HBV DNA整合于肝细胞基因组被认为是肝细胞损伤、HCC发生的主要机制之一。 HBV是一种嗜肝部分双链DNA病毒,其基因组长约3.2kb,具有4个主要的开放读码框架(ORF),分别命名为S、C、P、X区,HBsAg是由S区编码的表面蛋白,其编码区长度为681个核苷酸(nt),有226个氨基酸(aa)。HBV表面抗原蛋白具有多种生物功能,并在部分整合型肝细胞内大量表达。 为了解HBsAg整合入肝细胞基因组后,肝细胞内蛋白质表达谱变化,以进一步了解其对肝细胞生长代谢的影响,本研究成功构建了HBsAg的真核表达载体并建立稳定表达目的蛋白的Chang Liver-HBsAg-EGFP细胞系及空质粒对照的Chang Liver-EGFP细胞系,经双向凝胶电泳。应用ImageMaster 2DPaltinum 5.1软件(Amersham)对胶图进行斑点检测和匹配。选取差异蛋白质点,用MALDI-TOF—MS质谱进行分析,获得肽质量指纹图谱(PMF)。然后通过Mascot搜索查询和生物信息学分析,鉴定出9个数据可靠的差异表达蛋白质分子,与对照组相比,其中6个为上调蛋白(Proteindisulfide-isomerase precursor、HSP70 class molecular chaperones、stratifin、peroxiredoxin 1、Peroxiredoxin 5、guanylate-binding protein),3个为下调蛋白(Transgelin-2、capping protein(actin filament)muscle Z-line、Porin 31HM)。包括:抗氧化蛋白、分子伴侣,参与物质代谢蛋白,细胞信号传导相关蛋白质,细胞结构蛋白等。由此提示我们:整合至细胞基因组的表面抗原基因及其表达蛋白对细胞的生长、代谢、正常生理功能造成影响甚至有诱发癌变的可能。本研究为进一步进行关于HBsAg蛋白表达对肝细胞的影响,探索HBV感染的发病机制提供了实验依据和理论基础。


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