健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌菌群的分离与鉴定

【摘要】： 乳酸杆菌(Lactobacillus spp.)是育龄妇女正常阴道微生态菌群的主要组成部分,通过产生乳酸、过氧化氢、细菌素及其它的抗微生物物质来抑制阴道中的致病微生物,从而维护阴道的正常生理环境。临床研究表明,产生过氧化氢的乳酸杆菌的存在可以降低细菌性阴道病、淋病和HIV的发病率。本研究对223例健康育龄妇女阴道内的乳酸杆菌进行收集、分离、培养,并利用16SrRNA基因分析法鉴定细菌种属,从而了解我国育龄妇女正常阴道内乳酸杆菌的主要种类,分析其产生过氧化氢的能力,并研究乳酸杆菌随时间的定植变化,为利用乳酸杆菌进行微生态治疗提供依据。 第一部分:健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌菌群的分离与鉴定 目的:调查健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌的主要菌群种类及其产生过氧化氢的能力。方法:采集223例健康育龄妇女阴道侧壁的分泌物,经过乳酸杆菌选择性培养基(Rogosa)分离培养后,提取细菌染色体DNA,PCR扩增细菌的16S rRNA基因,测定16S rRNA核苷酸序列,然后与基因库(GenBank)中的数据进行比对,确定细菌的种类。并对乳酸杆菌产生过氧化氢的能力进行分析。结果:从223例健康育龄妇女阴道中分离到8种乳酸杆菌,较常见的种属为卷曲乳杆菌L.crispatus(53.7%),詹氏乳杆菌L.jensenii(27.9%)与格氏乳杆菌L.gasseri(10.3%)。其它少见的细菌类型包括阴道乳杆菌L.vaginalis(2.2%),L.coleohominis(1.5%),约氏乳杆菌L.johnsonii(1.5%),嗜酸乳杆菌L.acidophilus(1.5%)及发酵乳杆菌L.fermentum(1.5%)。大多数乳酸杆菌均能产生过氧化氢,L.crispatus、L.jensenii和L.acidophilus产生过氧化氢的能力较强。结论:L.crispatus、L.jensenii与L.gasseri是健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌的主要种属。L.crispatus、L.jensenii和L.acidophilus有较强的产生过氧化氢的能力。 第二部分:阴道内乳酸杆菌随时间变化的初步研究 目的:探讨阴道内乳酸杆菌是否随时间发生变化,即乳酸杆菌的稳定性,探讨益生菌的适宜种类。方法:对16例分离到乳酸杆菌的妇女进行长约3个月的随访,于月经间期采集阴道侧壁的分泌物,分离、培养及鉴定方法同上。结果:10例受试者的优势菌种在随访期内均与初始种类相同,6例受试者阴道内的优势乳酸杆菌在随访期间丢失或转变为其他种类,乳酸杆菌是否发生变化与年龄、月经周期、孕产史、避孕方式等均无相关性。结论:多数(62.5%)定植在阴道内的主要乳酸杆菌种类不易发生变化,尤其是L.crispatus的稳定性较强,可以考虑作为益生菌的筛选种类之一。