利用血清多肽图筛选卵巢癌血清标记物

【摘要】： 研究背景: 卵巢癌在妇科恶性肿瘤中发病率不是最高,但其死亡率居妇科恶性肿瘤首位,在妇女因恶性肿瘤死亡中居第四位。卵巢癌好发于绝经后女性,早期无症状,70%以上的卵巢癌确诊时已属晚期。近几十年来,卵巢癌手术治疗和化学治疗取得了很大进展,但晚期卵巢癌五年生存率仍维持在30%左右。早期卵巢癌(FIGOⅠ期)五年生存率可达90%。因此,寻找有效的早期诊断手段,提高Ⅰ期卵巢癌的诊断率是改善卵巢癌整体预后、降低治疗成本、提高生活质量的根本途径。而卵巢癌生物标记物是卵巢癌早期诊断的重要手段之一。 卵巢癌肿瘤标记物中最常用的是CA125,它是体腔上皮正常表达的一种抗原蛋白,晚期卵巢癌中,超过90%病例CA125升高,而在Ⅰ期卵巢癌中,大约有50%病例CA125正常,因此血清CA125敏感性和特异性不能满足筛查指标的要求。卵巢癌人群发病率相对较低,仅为40/10,0000,目前临床应用的肿瘤标记物均不能达到阳性预测值10%的普查要求。需要敏感性和特异性更高的标记物用于卵巢癌筛查。 生物质谱技术是发现和鉴定蛋白质有力工具,基于MALDI-TOF MS技术的Clinprot系统是一种新的液体蛋白质芯片技术,使用磁珠纯化和富集目标蛋白,是一种高通量、高度灵敏的蛋白质分析手段,可以用于肿瘤标记物的筛选研究。 目的:利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS)技术分析血清多肽图,建立卵巢癌血清诊断模型,寻找可以用于卵巢癌早期诊断的标记物。 方法:所有样本均来自解放军总医院,包括卵巢癌患者血清70例,健康对照血清59例,以52例卵巢癌患者血清和44例健康对照血清为训练组,18例卵巢癌患者血清和15例健康对照血清为验证组。选择国家生物医学中心自制的铜螯合磁珠试剂盒分离血清样本目标蛋白质/多肽,首先检验了系统的重复性,建立了稳定的Clinprot操作系统。之后,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS)对磁珠试剂盒处理的训练组52例卵巢癌血清样本、44例健康血清样本进行质谱分析,获取质谱数据,再利用Clinprotools~(TM)2.1软件对质谱数据进行分析,建立卵巢癌诊断模型;选取验证组18例卵巢癌血清和15例健康对照血清对产生的模型进行分类验证和交叉验证。 结果:本研究的日间重复性、日内重复性、反复冻融重复性峰强度的变异系数(CV)＜27%,符合国际公认的重复性要求;35-50岁健康女性不同年龄段的血肽图没有显著差异;通过Clinprotools 2.1软件对这训练组血清样品进行对比分析,在m/z 1000-10000的范围内共得到25个有统计学意义的差异多肽峰(P＜0.0001),表达上调的多肽有12个,下调的有13个;以这些峰建立的诊断模型在该训练集中的特异性达到96.67%,敏感性达到100%。分类验证中该模型正确识别了全部18例卵巢癌病例和15例健康对照中的14例;交叉验证显示该模型的敏感性100%,特异性93.3%。 结论: Clinprot系统以磁珠分离技术和MALDI-TOF MS技术为基础的,是一种高通量、具有良好重复性的蛋白质组学技术,用于卵巢癌血清肿瘤标记物的筛选取得了较高的敏感性和特异性;对该标记物进行鉴定、验证后有望用于卵巢癌普查。