收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

富组蛋白1促进人表皮细胞,人成纤维细胞增殖和迁移在创伤愈合中的作用及机制研究

蒋艳  
【摘要】:研究背景 口腔黏膜创伤较皮肤创伤愈合速度快,瘢痕少,是一种理想的愈合形式,此现象归因于口腔黏膜本身的组织结构特点以及特殊的唾液环境。近来研究发现唾液中的抗菌肽成分——富组蛋白能够促进口腔黏膜上皮细胞迁移,是口腔黏膜创伤愈合的主要影响因子。抗菌肽属天然免疫防御系统成员,目前研究发现其某些成员具有抵抗病原微生物以及促创伤愈合的双重功能,是一类极具应用前景的新型创伤治疗药物。由于特异性表达于人类及灵长类动物唾液,富组蛋白能否影响皮肤创伤愈合尚不清楚,研究甚少。 研究目的 本研究以皮肤创伤愈合相关细胞:人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株为研究对象,考察富组蛋白1(Histatin1,Hst1)对两者增殖和迁移功能的影响,并初步探讨其作用机制,旨在探明唾液特有抗菌肽Hst1对非口腔黏膜细胞的有无影响,能否促进皮肤创伤愈合,为促进皮肤创面愈合提供新的治疗思路。 研究方法 人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株按常规方法培养,取对数生长期细胞进行下述实验。 1.采用细胞计数法、MTT比色法考察不同浓度(3~100μg/mL)Hst1于不同时相点(24h、48h、72h)对人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株增殖功能的影响,并对其与人重组表皮生长因子(rhEGF)的相互作用关系进行比较。通过流式细胞术检测不同作用时相点不同浓度Hst1对两种细胞周期的影响,初步探讨其促增殖机制。 2.利用体外细胞划痕实验,考察不同时相点,丝裂霉素C(MMC)处理后或未处理时Hst1和(或)rhEGF对人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株划痕创伤愈合率的影响。 3.采用MTT法、体外细胞划痕实验,考察EGFR,TGF RⅡ,Syndencan-1及Syndencan-4四种细胞表面受体抗体对Hst1作用下人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株增殖、迁移功能的影响。 4.数据采用SPSS17.0统计软件进行方差分析,组间比较采用LSD-t检验或Dunnett’s T3检验。 研究结果 1.3μg/mL~100μg/mL Hst1能够促进HaCaT细胞增殖,且与浓度、时间呈依赖关系。 (1)细胞培养后24h,仅10ng/mL rhEGF组、30μg/mL Hst1+10ng/mL rhEGF组细胞数高于对照组(t=3.813,5.410,P<0.05或P<0.01)。除培养后48h30μg/mL Hst1组、3μg/mL Hst1组外,其余各实验组培养细胞后48h、72h,细胞数均显著高于对照组(t值为7.754~24.979,P<0.01)。培养后72h,100μg/mL Hst1组细胞数(19.21±0.59)×10~4个明显高于30μg/mL Hst1组(16.19±0.53)×10~4个以及3μg/mL Hst1组(15.38±0.13)×10~4个(t=11.391,19.017,P<0.01),30μg/mL Hst1+10ng/mL rhEGF组细胞数(19.75±0.35)×10~4个高于30μg/mL Hst1组,3μg/mL Hst1组及10ng/mL rhEGF组(19.19±0.09)×10~4个(t值为4.579~34.884,P<0.05或P<0.01)。各浓度Hst1单独作用组培养细胞后24h~72h内,细胞数随时间延长而增加(t值为16.629~68.891,P<0.01)。 (2)细胞培养后24h~72h内,各浓度Hst1组OD值均高于同一时相点对照组(t值为3.160~15.576,P<0.01或P<0.05)。同一时相点不同浓度Hst1组OD值随浓度降低而下降,24h~72h内100μg/mL Hst1组OD值均显著高于3μg/mL Hst1组(t值为4.264~7.234,P<0.01)。各浓度Hst1组细胞培养后72h、48hOD值均高于培养后24h同组内OD值(t值为6.219~22.308,P<0.01)。 (3)细胞培养后24h,48h,100μg/mL Hst1组(0.62±0.01,0.70±0.01)、30μg/mLHst1组(0.52±0.01,0.66±0.01)与对照组PI值(0.48±0.01,0.54±0.01)比较均显著提高(t值为4.752~16.10~4,P<0.01)。细胞培养24h~72h内,除72h30μg/mL Hst1组与3μg/mL Hst1组PI值比较无统计学差异外(t=0.273, P>0.05),各浓度Hst1处理组比较,随浓度增加PI值均明显提高(t值为3.690~17.459,P<0.01)。同浓度Hst1处理组组内48h PI值较24h明显增加(t值为7.607~15.582,P<0.01),72h较48h则明显降低(t值为-29.672~-18.657,P<0.01)。 2.30μg/mL Hst1能够促进HaCaT细胞划痕创伤愈合。MMC未处理时:细胞划痕加药处理后16h,30μg/mL Hst1组细胞愈合率(75.87±3.94)%显著高于对照组(52.98±3.50)%(t=12.241,P<0.01),但低于30μg/mL Hst1+10ng/mL rhEGF组(94.98±4.08)%、15μg/mL Hst1+5ng/mL rhEGF(97.05±3.67)%、15μg/mL Hst1+10ng/mL rhEGF组(80.55±5.94)%(t值为-11.324~-2.502, P<0.01或P<0.05)。各组内划痕后24h与16h比较,细胞16h愈合率差异无统计学意义(t值为0.990~1.771,P>0.05)。 MMC处理后:划痕后16h,30μg/mL Hst1组细胞愈合率(59.89±3.41)%高于对照组(38.40±4.22)%(t=7.790,P<0.01),但较MMC未处理时30μg/mL Hst1组明显下降(t=-10.863,P<0.01)。Hst1与rhEGF联合应用组16h划痕愈合率与30μg/mL Hst1组比较无统计学差异(t值为0.0614~2.030,P>0.05)。各组内划痕24h与16h比较,细胞愈合率差异无统计学意义(t值为0.925~1.750,P>0.05)。 3.3μg/mL~100μg/mL Hst1的Hst1能够促进人成纤维细胞增殖。 (1)细胞培养后24h~72h内,各浓度Hst1组细胞数较同一时相点对照组均增长(t值为4.062~47.370,P<0.01或P<0.05)。细胞培养后24h,100μg/mL Hst1组细胞数(3.89±0.18)×10~4个较3μg/mL组(3.13±0.53)×10~4个提高(t=4.040,P<0.05);培养后48h,30μg/mL Hst1组(5.02±0.71)×10~4个,3μg/mL组(5.00±0.35)×10~4个细胞数较100μg/mL Hst1组(4.13±0.18)×10~4个提高(t=3.661,6.680,P<0.05或P<0.01);培养后72h,30μg/mL Hst1组细胞数(12.37±0.18)×10~4个较100μg/mL Hst1组(9.50±0.71)×10~4个,3μg/mL组(10.13±1.24)×10~4个明显提高(t=11.808,5.349,P<0.01)。各浓度Hst1组培养细胞后24h~72h内,细胞数随时间延长而增长(t值为2.854~30.055,P<0.01或P<0.05)。同一时相点,30μg/mL Hst1+10ng/mL rhEGF组较单一使用Hst1或rhEGF相比细胞数均显著增加(t值为3.857~20.045,P<0.01)。 (2)细胞培养后24h~72h内,各浓度Hst1组OD值均显著高于同一时相点对照组(t值为3.712~18.262,P<0.01)。细胞培养后24h,100μg/mL Hst1组(0.50±0.02)较30μg/mL Hst1组(0.47±0.02),30μg/mL Hst1组较3μg/mL Hst1组(0.42±0.03)OD值均显著增加(t=3.187,5.036,P<0.01);培养后48h各浓度组间OD值比较无统计学差异(t值为1.279~2.375,P>0.05);培养后72h,与30μg/mL Hst1组(0.79±0.04)比较,100μg/mL Hst1组(0.70±0.04),3μg/mL组(0.62±0.03)OD值均明显降低(t=-6.484,-7.512,P<0.01)。对照组及各浓度Hst1组同组内培养细胞后24h~72h内, OD值随时间延长显著增长(t值为4.298~25.956,P<0.01)。 (3)细胞培养后24h,100μg/mL Hst1组(0.16±0.01)、30μg/mL Hst1组(0.16±0.01)PI值高于对照组(0.12±0.01)(t=6.790,6.052,P<0.01)。培养后48h,各浓度Hst1组PI值均高于对照组(t值为5.497~20.927,P<0.01);培养后72h,各浓度Hst1组PI值与对照组比较无统计学差异(F=2.583,P>0.05)。 细胞培养后24h,100μg/mL Hst1组PI值较30μg/mL Hst1组,30μg/mL Hst1组较3μg/mL Hst1组提高(t=7.662,5.828,P<0.01或P<0.05)。培养后48h,30μg/mL Hst1组PI值较100μg/mL Hst1组、3μg/mL Hst1组明显增加(t=11.875,15.430,P<0.05)。培养后72h各浓度Hst1组间PI值比较无统计学差异(F=3.909,P>0.05)。各浓度Hst1组培养后48h较培养后24h、72h组内PI值显著提高(t值为5.688~26.912,P<0.01) 4.30μg/mL Hst1能促进HF细胞划痕创面愈合。MMC未处理时:细胞划痕加药处理后8h,30μg/mL Hst1组划痕愈合率(37.50±2.22)%显著高于对照组(26.00±5.60)%(t=6.037,P<0.01),低于15μg/mLHst1+10ng/mLrhEGF组愈合率(45.24±3.26)%(t=-6.170,P<0.05)。 MMC处理HF后,各实验组8h愈合率两两比较,无统计学差异(F=1.822,P>0.05)。MMC处理或未处理相同成分及浓度对应组相比,各组8h愈合率显著下降(F值为-12.067~-5.824,P<0.01)。 随着时间延长,划痕愈合速度减慢,同组内16h与8h划痕愈合率差异均无统计学意义(F值为0.442~4.121,P>0.05)。 5. EGFR,TGF RⅡ,Syndencan-1及Syndencan-4四种受体抗体均能抑制Hst1对HaCaT细胞的增殖、迁移促进作用。 细胞加抗体处理后24h~72h,各抗体组较30μg/mL Hst1组OD值下降(t值为3.424~34.583,P<0.05或P<0.01)。 四种受体抗体处理细胞后细胞划痕愈合率降低,各抗体组16h愈合率[(41.15±0.95)%,(53.15±2.07)%,(46.24±2.51)%,(47.06±1.33)%]较30μg/mL Hst1组(71.02±2.42)%下降(t值为-36.333~-17.724,P<0.01)。其中,EGFR抗体组16h愈合率显著低于其余三种受体抗体(t值为-16.644~-6.000,P<0.01)。HaCaT细胞经MMC处理排除增殖后,各抗体组16h愈合率[(34.05±0.96)%,(45.76±2.02)%,(2.31±0.23)%,(4.75±0.36)%]较30μg/mL Hst1组(50.41±1.17)%下降,均具有统计学差异(t值为-127.235~-6.284,P<0.01)。其中,Syndencan-1,Syndencan-4受体抗体组愈合率均显著低于其余两种受体抗体组(t值为-102.068~-63.082,P<0.01)。 6. Syndecan-4抗体能抑制Hst1对HF的增殖促进作用。细胞加抗体处理后24h~72h,Syndecan-4抗体组OD值([0.37±0.03),(0.53±0.03),(0.64±0.03)]较30μg/mL Hst1组[(0.50±0.02),(0.65±0.03),(0.72±0.04)]显著下降(t值为2.868~11.462,P<0.01)。 细胞加四种受体抗体后Syndecan-4抗体组(21.83±2.19)%较30μg/mL Hst1组16h细胞划痕愈合率(31.23±2.66)%显著降低(t=7.132,P<0.01),且低于其余三种抗体组愈合率(t值为5.209~5.315,P<0.01)。随着时间延长,划痕愈合速度减慢,同组内16h与8h划痕愈合率差异均无统计学意义(t值为0.184~1.242,P>0.05)。 研究结论 1. Hst1能够促进HaCaT细胞增殖和迁移,其促增殖作用与浓度、时间呈依赖关系。Hst1与rhEGF联合应用时对HaCaT细胞增殖和划痕创伤愈合具有协同促进作用,而对迁移功能无明显协同作用。 2. Hst1能够促进人成纤维细胞增殖,但促迁移功能不明显。Hst1与rhEGF联合使用时对人成纤维细胞增殖和划痕创伤愈合具有协同促进作用。 3. EGFR,TGF RⅡ,Syndencan-1及Syndencan-4可能均与Hst1促进HaCaT细胞增殖、迁移有关,其中,Syndencan-1,Syndencan-4与Hst1促HaCaT细胞迁移明显相关。 4. Syndencan-4与Hst1促进人成纤维细胞增殖相关。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 徐岩英;富组蛋白及其转基因疗法治疗口腔念珠菌病[J];国外医学.口腔医学分册;1999年02期
2 赵心臣,乐进秋,魏国贤,刘宁慧,易安华,熊卫星;人腮腺唾液富组蛋白的分离提纯和鉴定[J];口腔医学纵横;1995年01期
3 罗海燕;富组蛋白与牙周病[J];国外医学.口腔医学分册;1999年02期
4 舒志军;华积德;;创伤愈合现状[J];中华创伤杂志;1986年04期
5 蒋华,宋振英,林庆华;实验性角膜移植术后内皮创伤愈合的形态学定量分析[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);1994年04期
6 杨金英,吴跃进,陈志东,许卫铭;创伤愈合实验动物模型的建立及实验方法[J];中国药理学通报;1995年01期
7 李秀兰;师宜健;陆静;徐尔真;;创伤渗出液中巨噬细胞结构和功能的观察——外用中药偎脓长肉作用机制的研究[J];中国中西医结合杂志;1998年S1期
8 谢举临;转化生长因子-β在创伤愈合过程中的研究进展[J];国外医学.骨科学分册;1999年02期
9 马轶群,王传富;整合素α_5及其配体在大鼠角膜创伤愈合中表达的研究[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);2001年04期
10 王蓬文,杨佩荪,周以建,陈晋杰,张连柱,董瑞安;羊水、胎皮与脐血对创伤愈合的影响[J];首都医科大学学报;2001年01期
11 邢叔星,尹志勇;一氧化氮在创伤伤口愈合中的作用研究进展[J];创伤外科杂志;2004年04期
12 张建国;;中药对软组织创伤愈合受体酪氨酸激酶活性的影响[J];四川中医;2006年08期
13 杨涛;司艺玲;颜光涛;;瘦蛋白与皮肤创伤愈合[J];生命的化学;2007年06期
14 青春;与创伤愈合有关的烫伤水疱液中细胞因子的研究[J];国外医学.骨科学分册;1996年02期
15 石冰,王志明,柳大烈,李玉霞;创伤愈合过程中酸性粘多糖的定位分布[J];实用美容整形外科杂志;1999年04期
16 蒋与刚,徐琪寿;条件性必需氨基酸在创伤愈合中的作用及其机制研究进展[J];氨基酸和生物资源;2002年03期
17 严泉剑,杨捷,张宇梅,李六金,刘海军,郭金龙,刘恩靖,邵国兴,王禾,哈小琴,吴祖泽;肝细胞生长因子促进膀胱平滑肌创伤愈合的研究[J];中华实验外科杂志;2003年07期
18 付小兵,程飚;重视老龄化对创面愈合影响的研究[J];创伤外科杂志;2005年05期
19 屈纪富;史春梦;江德鹏;郑怀恩;郝利;文亮;程天民;;热休克蛋白70在创伤愈合中的作用[J];创伤外科杂志;2006年06期
20 孟培松;胡波;胡成己;刘馥菲;王娜;毕良佳;;芦荟膏对拔牙创组织愈合的动物实验[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2008年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李艳;王冠;于虎;杨小凡;许松山;聂李亚;车永哲;;重组Thymosin 4调节Laminin-5促进创伤愈合的实验研究[A];天津市生物医学工程学会2008年年会暨首届生物医学工程与临床论坛论文集[C];2008年
2 李福伦;李斌;;Wnt信号通路与创伤愈合[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
3 朴永君;时磊;刘晓明;;鞘氨醇磷酸胆碱促进创伤愈合的研究[A];2009全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2009年
4 武强;;微量元素营养与创伤愈合[A];中国中西医结合学会疡科分会第十次全国学术会议论文汇编[C];2001年
5 孙耀兰;王友亮;王丽娟;郭水龙;张彦;杨晓;;靶向Smad4的miRNA在皮肤创伤愈合中的作用[A];中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2010年
6 王德文;秦全红;彭瑞云;高亚兵;崔雪梅;夏国伟;;照射对创伤愈合过程中成纤维细胞的影响及形态计量学研究[A];第九届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2001年
7 彭瑞云;;创伤愈合中血管再生及其调控研究进展[A];面向二十一世纪的生物医学体视学和军事病理学论文摘要汇编[C];2000年
8 秦全红;王德文;彭瑞云;高亚兵;;照射对创伤愈合过程中成纤维细胞的影响及分子机理研究[A];面向二十一世纪的生物医学体视学和军事病理学论文摘要汇编[C];2000年
9 杨涵铭;;创伤愈合的基本概念[A];第三届全国急诊创伤学学术交流会论文汇编[C];1999年
10 汤小朋;佘锐萍;林德贵;;蜂蜜对兔皮肤创伤愈合的影响[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集(小动物医学分册)[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋艳;富组蛋白1促进人表皮细胞,人成纤维细胞增殖和迁移在创伤愈合中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2012年
2 房林;骨髓间充质干细胞移植促进皮肤创伤愈合的实验研究[D];中国协和医科大学;2010年
3 汤小朋;几种免疫相关因子在兔皮肤创伤愈合过程中的动态变化研究[D];中国农业大学;2003年
4 宁浩勇;海水浸泡延迟伤口愈合的机制及救治研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
5 姚庆君;细胞增殖负性因子p16和Op18在烧伤愈合及疤痕形成中作用及机理[D];第四军医大学;2004年
6 李幼忱;毛囊真皮鞘细胞在皮肤创伤愈合中作用的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
7 简华刚;皮肤创伤愈合相关差异表达基因的克隆、筛选及鉴定[D];重庆医科大学;2002年
8 赵玉明;自体成纤维细胞注射移植的可行性研究[D];中国协和医科大学;2003年
9 李平;Ski在细胞增殖、创伤愈合及瘢痕形成中作用与意义研究[D];第三军医大学;2011年
10 李培兵;瘦素促进伤口愈合作用的机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高琪;唾液富组蛋白5抗白念珠菌作用的实验性研究[D];河北医科大学;2003年
2 朱慧颖;重组人粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对牙龈创伤愈合的影响[D];吉林大学;2012年
3 李艳辉;血小板凝胶促进创伤愈合的实验与临床研究[D];广州中医药大学;2011年
4 刘建伟;高糖对人成纤维细胞Wnt/beta-catenin信号通路表达的影响[D];泸州医学院;2010年
5 张敏;JNK/MAPK信号通路介导活化素B对皮肤创伤愈合的调控[D];南方医科大学;2010年
6 简宇;血管内皮细胞向间质细胞转化在创伤愈合过程中的作用研究[D];重庆医科大学;2011年
7 崔文慧;mTOR信号通路与创伤愈合的相关性研究[D];重庆医科大学;2012年
8 林锋;表面等离子共振和荧光猝灭动态监测三种天然色素与人唾液及富组蛋白5的相互作用[D];福建医科大学;2009年
9 孙耀兰;角质细胞特异性过表达miR-142转基因小鼠的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
10 袁瑞红;EGF、bFGF、PDGF、TNF-α及NGF对瘢痕成纤维细胞影响的实验研究[D];昆明医学院;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 谢耕发;改善创伤愈合质量的学术机构成立[N];科技日报;2000年
2 张献怀;我国学者首获国际创伤愈合研究杰出成就奖[N];科技日报;2008年
3 赵织春;改善创伤愈合与组织修复质量学术活动[N];科技日报;2000年
4 张忠霞;受伤动物为何自舔伤口?从人类唾液实验窥秘[N];新华每日电讯;2008年
5 张献怀;付小兵获国际创伤研究杰出成就奖[N];中国医药报;2008年
6 ;枸杞子能有限延长人成纤维细胞寿命[N];中国中医药报;2005年
7 刘东 朱广平 邹争春;三军医大国家重点实验室通过科技部验收[N];中国医药报;2005年
8 方彤;慢性腮腺病诊治创新八方面[N];健康报;2004年
9 刘东 朱广平;三军医大国家重点实验室验收[N];科技日报;2005年
10 冉新泽;刘长满;彭川;我国复合伤研究再结硕果[N];中国医药报;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978