Fyn通过hnRNP E1调节integrin β1选择性剪接调控胰腺癌转移分子机制研究

【摘要】：一、研究背景胰腺癌是一种致死率极高的消化道恶性疾病,发病早期肿瘤细胞即发生局部侵袭与远处转移。胰腺癌的主要临床病理特征之一就是肿瘤细胞周围存在着大量的纤维组织以及丰富的细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)。这些特殊的ECM成分能够通过激活肿瘤细胞表面整合素Integrin及其胞内信号分子的相互作用调控胰腺癌的侵袭与转移。因而,深入理解胰腺癌中Integrin及其胞内信号分子之间的这种相互调控作用能够为理解胰腺癌的转移提供新的理论依据。选择性剪接修饰是基因转录后调控的一种重要的分子机制。其异常变化往往会导致肿瘤的发生与发展。因而,解析肿瘤细胞中基因选择性剪接的分子调控机制能够为肿瘤的临床诊治提供潜在的干预靶点。前期研究发现非受体酪氨酸激酶Fyn及Integrinβ1在胰腺癌的转移过程中发挥了十分重要的作用。抑制Fyn的活性能够上调胰腺癌细胞中核内不均一蛋白hnRNP E1以及integrinβ1C剪接体的的表达。由于hn RNP E1具有调控基因选择性剪接的功能,因而我们推测:胰腺癌中Fyn的活性能够通过影响hnRNP E1的表达与功能从而调控integrinβ1基因的选择性剪接,并最终影响胰腺癌的转移。本课题主要研究胰腺癌中hnRNP E1剪接子功能复合物调控integrinβ1基因选择性剪接的分子机制。二、研究方案1.我们首先检测了本研究所收集的76例胰腺癌临床标本中hnRNP E1和integrinβ1剪接体的表达,并将检测结果与胰腺癌病人的临床资料进行了相关性分析;2.我们利用BxPC3和Panc-1胰腺癌细胞分析了抑制Fyn活性对细胞中hnRNP E1和integrinβ1剪接体表达的影响;3.我们通过干预hnRNP E1的表达分析了hnRNP E1对BxPC3和Panc-1胰腺癌细胞中integrinβ1基因选择性剪接的影响;4.我们利用RNA免疫共沉淀、蛋白质免疫共沉淀、质谱分析、RNA干扰实验分析了胰腺癌细胞中hnRNP E1剪接子功能复合物对integrinβ1基因选择性剪接的调控机制;5.我们利用在体与离体的实验方法分析了Fyn通过hnRNP E1调控胰腺癌细胞运动与转移的能力;三、研究结果1.胰腺癌组织中hn RNP E1蛋白的胞浆分布以及integrinβ1A剪接体的表达与胰腺癌的TNM分期、淋巴结转移及肝转移具有显著的相关性并且hn RNP E1蛋白的胞浆分布与integrinβ1A剪接体的表达具有显著的正相关性;2.胰腺癌细胞中Fyn的活性通过PAK1调控hn RNP E1的磷酸化水平及其细胞内分布;并通过调节细胞核内hnRNP E1剪接子功能复合物中hnRNP A1和SF2/ASF的组成比例,调控integrinβ1基因的选择性剪接;3.Fyn通过hnRNP E1调控了胰腺癌细胞的迁移、侵袭与转移能力;四、研究结论胰腺癌中Fyn的活性通过PAK1调控hn RNP E1的磷酸化水平及其细胞内分布;并通过调节细胞核内hn RNP E1剪接子功能复合物中hn RNP A1和SF2/ASF的组成比例,调控integrinβ1基因的选择性剪接,并最终影响胰腺癌的侵袭与转移。