收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Pleurocidin及其优化多肽抑制常见致龋菌的研究

陶睿  
【摘要】:尽管人们已经做了许多努力来控制和预防龋病,但是其依然是影响人类生活、学习、工作的三大流行传染病之一。龋病的主要病原体目前被确定为变异链球菌和远缘链球菌,并且粘性放线菌和链球菌戈登是牙齿表面的早期定殖菌[1]。但是杀灭这些细菌是非常困难的,因为口腔微生物能够形成牙菌斑生物膜。这种生物膜能够为细菌提供一定的保护能力,可以增加细菌对抗菌药物的抵抗能力[2]。机械去除(刷牙、龈上下洁治术)菌斑依旧是首先选择的治疗方法,但是其也并不能完全去除菌斑,因此目前的研究主要集中于如何在机械去除菌斑的基础上使用抗菌剂抑制、杀灭细菌。为此本实验对天然多肽pleurocidin的抗菌能力进行了研究,并在此基础上改造、修饰优化多肽,使其能够更好的发挥抗菌的能力。 1、Pleurocidin对口腔常见致龋菌抑菌作用研究 Pleurocidin是从Pleuronectes americanus的表皮中分离出来的天然多肽。其具有较为广谱的抗菌活性,能够抵抗多种细菌和真菌。此外,与其他天然多肽相比,在体外毒性研究中pleurocidin表现出较低的溶血性,具有潜在的治疗价值。 在第一部分实验,我们对pleurocidin能否作为一种有效的抗菌多肽运用于龋病的治疗进行了检测。多肽对常见致龋微生物的抗菌机理也进行了研究。我们检测了pleurocidin的最小抑菌浓度(MIC),最小杀菌浓度(MBC)和杀菌动力学的特性,并进行了唾液影响pleurocidin抑菌效果的抑菌环实验。BioFlux系统用于生成可控剪切力下细菌生物膜的形成及pleurocidin对生物膜的抑制作用研究。荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)用来分析和观察生物膜,扫描电子显微镜用于观察细菌细胞膜。 MIC和MBC结果表明,pleurocidin对不同的口腔细菌有不同的抗菌活性。虽然唾液中的成分可能会影响抗菌活性,溶解于唾液中的pleurocidin仍然具有对口腔微生物的抗菌作用。此外体外模拟实验显示,pleurocidin对于变异链球菌生物膜具有一定的抗生物膜能力。我们的研究结果表明,pleurocidin具有杀死口腔生物膜,防止龋齿的运用潜力。 2、基于Pleurocidin的新型抗菌多肽的优化设计 鱼类具有强有力的天然免疫系统,从而能够应对大量的病原微生物。我们在之前已经证明α螺旋线性阳离子多肽Pleurocidin具有抗致龋菌、真菌的能力,并对变异链球菌生物膜有一定的抑制作用。但是pleurocidin的长度为25个氨基酸,过长的氨基酸提高了成本和降低了其对细菌生物膜的渗透能力,因此开发出新的具有高抗菌活性的短肽就更为必要。 本研究在确定pleurocidin活性中心的基础上(GW18),新设计十几种多肽。经过我们的检测发现,GW18来源的pc1、pc8、pc9、pc11、pc12这几种对于口腔的几种常见致病菌有较强的抗菌能力。其中pc9是抗菌效果最好的多肽,pc12是具有抗菌能力里面最短的多肽。我们通过对多肽物理性质的分析,确定疏水性和多肽长度对抗菌能力最为重要。最后通过检测多肽的杀菌动力学特性,发现该类型多肽属于快速杀菌多肽的类型。 3、新型多肽Pc9、Pc12的抗菌原理及细胞毒性研究 很多多肽都有一定细胞毒性,甚至有很强的溶血作用。理想中的多肽是在具有抗菌能力的前提下,对细胞、宿主没有任何毒副作用,不会引起机体的过敏反应。实验的第二部分确定了pc9、pc12的抗菌能力,为此我们通过电镜、细胞实验更进一步探讨研究这一新型多肽的抗菌机理和细胞毒性。 扫描电镜显示用多肽Pc9、Pc12处理过后,变异链球菌和血链球菌的细胞膜受到多肽的影响。抗菌多肽使细菌表面失去原有性状,变得粗糙甚至有出现孔隙。该孔隙直径大约为10nm左右,说明该多肽是通过在细菌表面形成离子通道,引起细菌内容物的流出,从而导致细菌的死亡。这种机理与原来设计多肽的时候设计是相一致的。细胞毒性显示当使用8×MIC的浓度的pc9和pc12处理HGFs,共培养2小时后,均显示对细胞有一定的影响。但是短时间处理时(5分钟、1小时),没有统计学上的差异。说明多肽的细胞毒性还是时间依赖型的。并且由于pc12在处理变异链球菌1小时以后,细菌均已经死亡。说明该多肽在杀菌时间内对细胞的影响轻微,有一定的临床运用价值。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 周学东,岳松龄,吴良行,郑光静;致龋菌混合培养产细胞外多糖的分析[J];四川大学学报(医学版);1988年04期
2 季瑾;杨圣辉;李金陆;;致龋菌对牙周炎形成影响的动物实验研究[J];北京口腔医学;2010年05期
3 周学东,岳松龄;致龋菌有机酸产生与时间的关系[J];实用口腔医学杂志;1991年03期
4 李艳君;天然生物提取物防治龋病的研究概况[J];国外医学.中医中药分册;1999年03期
5 冯瑾;李继遥;周学东;;厚朴活性成分对致龋菌生长和产酸影响的体外研究[J];四川大学学报(医学版);2007年03期
6 王少虎,樊明文,边专;中草药防龋研究进展[J];国外医学.口腔医学分册;2001年01期
7 胡轶;苏丽萍;杨文晔;王胜朝;;益生菌对口腔健康的影响[J];广东牙病防治;2010年07期
8 周学东;岳松龄;杨泽蓉;;糖类型对混合致龋菌产酸影响的研究[J];口腔医学研究;1990年01期
9 马旭东;;龋病菌群失调导致口腔异味的研究[J];中外医疗;2008年16期
10 杨霞;黄萍;李丛华;;中药桂皮醛对口腔致龋菌的体外抑菌活性研究[J];重庆医科大学学报;2009年10期
11 王岷峰;李德懿;李宗林;;牙周致病菌和致龋菌间生长关系的体外动态观察[J];北京口腔医学;2009年05期
12 季瑾;杨圣辉;李金陆;王冬青;;致龋菌与牙周致病菌混合感染动物模型的初步研究[J];中国微生态学杂志;2010年10期
13 肖悦!610041,刘天佳!610041,詹玲!610041,周学东!610041;茶多酚影响致龋菌在唾液获得性膜粘附的研究[J];华西口腔医学杂志;2000年05期
14 李玲,石四箴;氟化物的防龋作用[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2001年02期
15 王岷峰;李德懿;李宗林;;牙周致病菌和致龋菌对羟基磷灰石的附着能力[J];上海交通大学学报(医学版);2007年01期
16 毛理纳,尹嘉;厚朴酚抗菌作用的实验观察[J];中国公共卫生学报;1999年04期
17 刘晓丹,石四箴;茶多酚防龋研究进展[J];上海医学;2005年09期
18 刘正;;主要致龋菌的分离和培养[J];口腔医学研究;1988年02期
19 孙崇奎;卢礼兵;朱硃;龚其美;肖晓蓉;肖丽英;周学东;李燕;;醋酸铅棉球法筛选口腔产硫化氢细菌的研究[J];国际口腔医学杂志;2010年05期
20 李鸣字,刘正;人口腔主要致龋菌的红外光谱分析[J];广东牙病防治;1993年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 关晓旭;梁雪;徐欣;李继遥;;蜂房主要有效成分槲皮素对口腔致龋菌的影响[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
2 梁景平;姜云涛;李超伦;姜葳;;实时PCR技术在龋易感儿童牙菌斑致龋菌定量检测中的应用[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
3 冯瑾;李继遥;周学东;;厚朴活性成分对致龋菌生长和产酸影响的研究[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
4 朱敏;张志民;葛久禹;汤旭娜;;致龋菌中耐酸相关基因ffh同源性的比较[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
5 高银凤;;托槽粘接前后牙面菌斑中主要致龋菌的比较分析[A];FDI、CSA临床口腔进展学术会议论文汇编[C];1999年
6 何艳丽;刘学军;;牙周基础治疗前后致龋微生物与根龋易感性的研究[A];中华预防医学会微生态学第二届特种医学暨河南省、山东省预防医学会微生态学学术研讨会论文集[C];2006年
7 樊明文;;防龋DNA疫苗[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
8 储冰峰;赵皿;张彤;杨祖安;;变形链球菌葡萄糖基转移酶基因部分DNA克隆[A];全国第四次牙体牙髓病学术会议论文汇编[C];1995年
9 王丽娜;吴红崑;牛卫东;;十肽(KSL)对口腔主要致病菌生长影响的初步研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
10 刘天佳;岳松龄;;国内外龋病分子生物学研究的现状和未来[A];中华口腔医学会成立大会暨第六次全国口腔医学学术会议论文汇编[C];1996年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陶睿;Pleurocidin及其优化多肽抑制常见致龋菌的研究[D];第四军医大学;2012年
2 童忠春;Nisin抗菌肽抑制致龋菌和根管感染致病菌的体外研究[D];第四军医大学;2012年
3 左渝陵;天然药物防龋的物质基础研究[D];四川大学;2005年
4 林英光;纳米羟基磷灰石复合改性材料的制备及其抗龋性能研究[D];华南理工大学;2007年
5 冯瑾;天然药物厚朴防龋作用的药效学研究[D];四川大学;2007年
6 甘瑜;哈茨木霉菌非水溶性葡聚糖酶的基础及应用研究[D];武汉大学;2005年
7 陆玉;变形链球菌糖代谢相关基因的差异性表达与其致龋性关系的研究[D];四川大学;2006年
8 杨德琴;不同龋敏感人群变形链球菌产酸耐酸毒力因子遗传多态性研究[D];四川大学;2005年
9 闫文娟;c-di-GMP信号通路在变形链球菌致龋过程中作用的初步研究[D];第四军医大学;2009年
10 汪鋆植;茄根酸性组分对牙周炎的治疗作用及作用机理研究[D];成都中医药大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 武狄聪;牙菌斑生物膜致龋毒力因子和致龋菌在龋病进展中的动态变化[D];遵义医学院;2011年
2 韩慧;LPE对五种致龋菌生长及表兄链球菌相关酶活性的影响[D];天津医科大学;2012年
3 肖杰;乳牙化学机械去龋的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
4 邢向辉;实时荧光定量聚合酶链反应检测儿童口腔致龋菌的实验研究[D];第四军医大学;2002年
5 朱敏;致龋菌中耐酸相关基因ffh的检测及克隆[D];吉林大学;2004年
6 许小辉;光动力学疗法对口腔致龋菌的体外抗菌作用及对人工菌斑生物膜形成的影响[D];重庆医科大学;2011年
7 张蕾;不同能量密度HMME-PDT对防龋效果影响的实验研究[D];天津医科大学;2011年
8 李苹苹;国产水溶性蜂胶对主要致龋菌菌斑生物膜形态及产酸的影响[D];重庆医科大学;2010年
9 闫莉肭;乳杆菌DM9811代谢产物对固定正畸治疗患者口腔内主要致龋菌的影响[D];大连医科大学;2007年
10 张小兵;老年根面龋易感者牙菌斑与唾液中致龋菌分析[D];广西医科大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 全国牙防组提供 王俊聪;防婴幼儿龋齿把住科学喂养关[N];健康报;2006年
2 陈宗伦;儿童饮茶龋齿少六成[N];健康时报;2008年
3 健康时报特约记者 李大鲁尹静;四种中药能防龋齿[N];健康时报;2007年
4 阙国鹰 (夏青整理);龋齿发病四要素[N];大众卫生报;2009年
5 李大鲁尹静;我国龋齿发病率高 中药能有效预防[N];中国中医药报;2008年
6 圣晶;牙好,身体就好[N];医药经济报;2004年
7 琳琳;嚼口香糖应在一刻钟以内[N];保健时报;2006年
8 本报记者 王均珠;重视口腔问题 让儿童健康成长[N];贵阳日报;2006年
9 四川大学华西口腔医学院 李少敏;幼儿龋病一定要治[N];健康报;2007年
10 指导专家 重庆医科大学附属口腔医院内科副主任医师 周智 记者 许宏;孕妇更要注意牙齿健康[N];医药导报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978