收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

多表位融合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti-HCV可行性研究

李保昌  
【摘要】:研究目的:anti-HCV检测对于控制HCV经输血传播,及时诊断HCV感染患者发挥了巨大的作用。目前所用第三代ELISA检测试剂较早期试剂在灵敏度和特异性上都有了很大提高,但在检测低感染率(<10%)人群时特异性仍不理想,阳性结果人群中约35%(15%-60%)为假阳性,在献血员中阳性结果的预示值仅为70-80%,造成了医疗资源和宝贵血源的很大浪费。双抗原夹心法在方法学上比目前所用间接法特异性更好,灵敏度更高,本研究旨在建立双抗原夹心anti-HCV ELISA检测方法,以解决间接法特异性不足问题。 研究内容: 1.多表位融合重组HCV抗原基因的克隆与序列分析 选择HCV结构蛋白和非结构蛋白优势抗原表位的编码基因,以及来自HCV不同病毒型别的抗原表位编码基因共12个,拼接成长度为1450bp的嵌合抗原编码序列,插入pQE-30和pinpoint T表达载体,分别转入M15和JM109(DE3)工程菌,应用PCR扩增和测序证实插入序列具有正确的编码序列和正确阅读框架。 2.多表位融合重组HCV抗原的表达、纯化与活性鉴定 将M15和/M109(DE3)工程菌诱导表达显示,融合蛋白在M15中以包涵体形式表达,带有6×组氨酸标签;在JM109中可溶性表达,氨基端带有生物素化的标签。表达蛋白经亲和纯化后分别测定各抗原表位的分片段抗原性和生物素标签的亲和素结合活性。结果表明重组蛋白抗原性完整,可以用于anti-HCV的检测;生物素标签具有良好的亲和素结合活性,可用作ELISA检测的信号放大系统。 博士学位论文:多表位触合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti一HCV可行性研究 3.Anti一HCv双抗原夹心EL工SA法的建立及效果评价 用His一tagged一HCV抗原包被酶联板,以可溶性表达的biotin一tagged一HCV作 为夹心抗原,Str即tav 1 d in一HRP用作显色用酶标记物建立了双抗原夹心法。 结果显示,方法具有极好的特异性,400份阴性血清无一例假阳性; 接法检测阳性的标本中,有12份标本双抗原夹心法检测阴性,这 RT一PCR及RIBA确证试验均为阴性。 结论:目前anti一HCV的检测国内外均只有间接ELISA法,本文选取 临床350 应用 份间 12份标本经 优势表位和不同型别抗原表位, 抗原去除了与检测无关的序列, 构建了多表位融合重组HCv抗原。 HCV各抗原的 优势表位融合 避免了非特异反应的发生;同时由于兼顾了不同 HCV型别差异,也会使检出率有所提高。带有生物素标签的融合抗原克服了分片段 抗原联合应用时难以掌握配比及酶标记对抗原活性影响等难题,使双抗原夹心检 测anti一HCV得以实现。本研究所建立的双抗原夹心ELISA检测法的特异性远高于 目前广泛使用的间接法,双抗原夹心法能同时检测IgG、IgM和工gA抗体,提高了 检出率,应用Biotin--avidin这一成熟稳定的信号放大系统提高了方法灵敏度。如 用于anti一HCV筛查,可以显著降低宝贵血源的浪费,并减少临床误诊率,节约医 疗资源:并有可能代替昂贵复杂的RIBA,成为简便易行的anti一HCV确证试验。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李庆生,郭建平,陶其敏;丙型肝炎病毒非结构基因NS5在大肠杆菌中的高效表达[J];中华实验和临床病毒学杂志;1996年03期
2 张立伐,彭文伟,姚集鲁,唐永煌;丙型肝炎病毒感染与ras、p53基因表达的相关性[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1996年04期
3 徐东刚,逯好英;中国人丙型肝炎病毒基因组部分 NS5 区基因的克隆、表达及应用研究[J];军事医学科学院院刊;1997年01期
4 王安辉;丙型肝炎病毒及其相关的肝细胞肝癌[J];国外医学.病毒学分册;1998年01期
5 ;免疫电镜观察丙型肝炎病毒颗粒[J];中西医结合肝病杂志;1995年04期
6 吴英松,董文其,张彦明,李明;一种新型丙型肝炎病毒培养方法的建立[J];中国生物工程杂志;2004年01期
7 彭向欣;丙型肝炎病毒NS 3不同末端在COS、NIH 3T3细胞中的转录与表达[J];中日友好医院学报;2005年01期
8 刘芳华,田庚善,傅希贤,张国庆;部分国产抗丙型肝炎病毒抗体试剂盒与新加坡试剂盒性能的比较[J];中华实验和临床病毒学杂志;1994年02期
9 谢晨,吴建莹;丙型肝炎病毒基因分型及其意义的研究进展[J];中华微生物学和免疫学杂志;2001年S1期
10 冯志华,周永兴,杜德伟,王全楚,李谨革,焦成松,李文波;丙型肝炎病毒包膜基因对核心基因DNA疫苗免疫应答强度的影响[J];实用肝脏病杂志;2003年03期
11 杨敬,薛小平,雷迎峰,尹文,吕欣,徐志凯;丙型肝炎病毒ns3区全长基因在大肠杆菌中的高效表达及纯化[J];生物技术通讯;2005年01期
12 贾战生;杜德伟;刘秋平;王春雨;秦鸿雁;魏欣;赵甫涛;李光玉;韩骅;;CD81介导丙型肝炎病毒入胞作用的研究[J];中华肝脏病杂志;2006年07期
13 汤权,杨永平,夏宁邵,刘崇柏;一种快速有效的丙型肝炎病毒cDNA克隆的筛选和鉴定方法[J];病毒学报;1993年03期
14 HarrisonTJ,舒浩麒;丙型肝炎疫苗的展望[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1995年04期
15 肖定华,逯好英,凌世淦;抗-丙型肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的研制[J];生物技术通讯;1995年02期
16 伍佩仪;丙型肝炎病毒基因型研究概况[J];湖北预防医学杂志;1996年04期
17 秘晓林;丙型肝炎病毒的分子生物学[J];微生物学免疫学进展;1996年02期
18 唐小平,袁小珍,吴婉芬,唐漾波;丙型肝炎病毒三种不同分型方法的比较[J];中华实验和临床病毒学杂志;1997年02期
19 刘洋,杨珍珠,李超群;慢性丙型肝炎患者外周血T细胞及其亚群的变化和意义[J];上海铁道大学学报(医科版);1997年04期
20 宓余强,梁树人;丙型肝炎病毒研究进展[J];国外医学.病毒学分册;1998年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 韩振格;孟继鸿;;双抗原夹心ELISA检测抗-HCV的初步建立[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
2 周锦萍;孙泉云;刘佩红;薛霞;李凯航;卢军;张维谊;齐新永;;上海地区多种动物中戊型肝炎病毒感染状况调查[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
3 来家骐;夏景媛;;丙型肝炎病毒感染与临床[A];第五次全国中西医结合中青年学术研讨会论文汇编[C];2004年
4 李秋莲;;慢性丙型肝炎患者躯体症状与肝脏功能及气质类型的相关性分析[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
5 毛慧娟;邢昌赢;俞香宝;胡建明;沈霞;王笑云;;血液透析中丙型肝炎病毒感染危险因素分析[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
6 章友康;;丙型肝炎病毒(HCV)相关性肾炎[A];中华医学会肾脏学分会2004年年会暨第二届全国中青年肾脏病学术会议专题讲座汇编[C];2004年
7 张兴明;谢进荣;;抗-HIV一步法用全自动加样仪加样同时出现拖带反应与钩状效应1例[A];中国输血协会第三届输血大会论文专辑[C];2004年
8 朱研;谭朝霞;范焱;张长江;王小红;;丙型肝炎病毒动态准种优势株的确定[A];病毒性肝炎慢性化、重症化基础与临床研究进展学术会议论文汇编[C];2009年
9 尹文;雷迎峰;杨敬;张为;吕欣;薛小平;徐志凯;韦三华;李毅;刘兵;;抗HBV与HCV免疫乳的实验免疫研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
10 方彩云;易志刚;申华莉;陆豪杰;袁正宏;杨芃原;;转染丙型肝炎病毒前后人肝细胞的磷酸化蛋白质组分析[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李保昌;多表位融合HCV抗原的构建与双抗原夹心检测anti-HCV可行性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
2 阎瑾琦;丙型肝炎病毒重组复合表位抗原的免疫原性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
3 李克;丙型肝炎病毒蛋白相互作用蛋白基因克隆化及Hcbp6功能研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
4 刘晶;丙型肝炎病毒被膜蛋白的表达、纯化与应用研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2002年
5 毛红霞;丙型肝炎病毒不同基因亚型NS3蛋白酶比较及相关细胞蛋白的筛选[D];复旦大学;2003年
6 高军;丙型肝炎病毒多表位抗原的基因合成与免疫原性研究[D];第二军医大学;2004年
7 梁雪松;IRES特异性抑制性RNA阻断丙型肝炎病毒基因表达的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
8 张琳;丙型肝炎病毒准种感染与干扰素疗效关系的研究[D];中国医科大学;2003年
9 张欣欣;丙型肝炎病毒高变区1高反应性多肽筛选、表达及其特性研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
10 杜德伟;丙型肝炎病毒的受体研究——B族Ⅰ型清道夫受体介导HCV入胞作用的研究[D];第四军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吕丽萍;丙型肝炎病毒感染的小鼠肝癌细胞模型研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
2 关岚;男性吸毒人群中丙型肝炎病毒感染状况及其影响因素的研究[D];中南大学;2003年
3 刘卫东;丙型肝炎病毒ns5b基因克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
4 彭翼飞;限制性显示PCR技术在丙型肝炎病毒基因芯片制备中的应用[D];第一军医大学;2001年
5 孙利;丙型肝炎病毒DNA疫苗的实验研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
6 陈寅;牛奶、鸡蛋过敏原的鉴定、纯化及应用研究[D];天津医科大学;2011年
7 李轶女;丙型肝炎病毒融合抗原基因CE、NS3CE转基因番茄的培育[D];中国农业科学院;2001年
8 李菲;用杆状病毒系统表达丙型肝炎病毒结构蛋白[D];东北农业大学;2002年
9 吴娴波;丙型肝炎病毒核心抗原基因片段的克隆、表达及蛋白的纯化和抗原性分析[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
10 陈昊;丙型肝炎病毒高变区1合成肽抗原性的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 赵引德;丙烯酸乳液型涂料市场受宠[N];中国建材报;2005年
2 实习生 田秋平 本报记者 孙春艳;远离丙型肝炎[N];吉林日报;2005年
3 汪挺;接种流感疫苗有利于防“非典”?[N];中国商报;2003年
4 梁学义;尖首刀究竟出自谁家[N];中国商报;2004年
5 中日友好医院感染疾病科 马安林;保肝护肝 一级预防最重要[N];保健时报;2006年
6 骆超;景达基因:早期逮住丙肝病毒[N];中国高新技术产业导报;2005年
7 ;献血常识[N];卫生与生活报;2003年
8 子文;防患未然更重要[N];医药经济报;2003年
9 王宇明;我们正在低估丙肝[N];健康报;2006年
10 记者 李佳路;感冒与用药[N];新华每日电讯;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978