质粒DNA的雾化及其吸入免疫的研究

【摘要】：由于呼吸道具有巨大的吸收面积，上皮细胞丰富且肺上皮细胞极薄并有良好的通透性，核酸等生物大分子通过雾化能够在呼吸道局部达到较高的浓度，并得到有效表达。通过雾化方式进行基因转移已成为呼吸道基因治疗和免疫的一种有效途径。 我们采用TK-2型气溶胶发生器采用合适的发生条件可以保证相当一部分裸质粒DNA发生1小时后仍然保持其体外细胞转染和细菌转化的活性。气溶胶粒子粒谱分析仪的粒谱检测结果表明，质粒气溶胶的数量中值直径(NMD)约为1μm，说明大部分气溶胶粒子能够到达呼吸道深部。在此基础上，将甲型流感病毒A／PR／8／34毒株血凝素基因的真核表达构建质粒pCAGGSP7／HA经试剂盒大量提取并纯化后，采用雾化吸入等方法免疫BALB／c小鼠。免疫组化法显示，除了阴性对照组，在各组均可以看到肺组织中质粒的表达情况，但程度不同，表明在合适的气溶胶发生条件下裸质粒能够转染小鼠呼吸道；用ELISA法检测不同方法免疫后，雾化组小鼠的血清IgG抗体和肺灌洗液IgA抗体的效价均可以达到一定的水平；MTT法的脾细胞增殖实验显示，雾化组小鼠的细胞免疫情况也明显高于对照组；流感病毒攻击后，各组动物的存活率高低依次为滴鼻吸入组、雾化吸入(70min)、肌肉注射组、雾化吸入(40min)和阴性对照组。这些结果提示质粒DNA气溶胶可能也是一种有前景的基因免疫途径。