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人白细胞介素22的克隆表达及功能研究

蔡欣  
【摘要】:白细胞介素-22(IL-22)是于2000年发现的由激活的T细胞分泌的细胞因子,属于IL-10家族。功能性IL-22受体复合物由IL-22R1和IL-10R2两条受体链组成,IL-22通过与两条受体链的结合,激活受体复合物介导的多重信号途径,包括Janus kinase信号转导及转录活化蛋白(STAT)的激活剂及在肝细胞被激活的促有丝分裂蛋白激酶途径。而与其中一个受体单独结合时,IL-22不能介导细胞内信号转导通路。在功能方面,IL-22可以上调肝急性期蛋白表达和胰腺相关蛋白PAP1/Reg2和OPN的高表达,表明IL-22在炎症反应中起作用;在肠上皮细胞、肺上皮细胞、神经元细胞、肾小球系膜细胞、肝细胞及黑素瘤细胞中,IL-22能激活STAT转录因子。它对伴刀豆球蛋白(ConA)刺激下Th2细胞的IL-4的分泌有一定的抑制作用,这对于哮喘也有潜在的治疗作用。近期研究表明,IL-22是肝细胞的一个存活因子,激活的T细胞通过释放IL-22也可以预防和修复肝损伤。 本研究从CD3抗体和ConA共刺激的人外周血白细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到了不含信号肽的hIL-22的基因。然后,将hIL-22基因插入pBV220载体中,构建重组质粒pBV-IL22。同时为了尝试可溶性表达hIL-22,我们将目的基因插入pET-17b载体中,构建了重组质粒pET-IL22。将pBV-IL22分别转化大肠杆菌DH5α、JM109、HB101,将pET-IL22转化大肠杆菌BL21,筛选出阳性转化菌落获得相应工程菌株,结果表明hIL-22在大肠杆菌HB101中表达量最高,可达菌体总蛋白的40%以上。目的蛋白在大肠杆菌中的表达产物以包涵体形式存在,包涵体经洗涤后以Sephacryl-300凝胶柱层析纯化,目的蛋白的纯度可达90%以上。纯化蛋白在还原型和氧化型谷胱甘肽组成的氧化还原体系中进行复性,PEG20000浓缩,获得了具有活性的hIL-22的纯品。MTT法检测到hIL-22对HepG2细胞有明显的促增殖作用。利用半定量RT-PCR方法初步探讨了IL-22体外刺激人肝癌细胞HepG2、正常人肝细胞LO2表达c-myc和bcl-2的情况,结


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