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西尼罗病毒感染病原体检测方法与流行病学调查研究

张久松  
【摘要】:西尼罗病毒(WNV)感染是一种经蚊虫传播,以鸟类为主要动物宿主的自然疫源性疾病。人被携带病毒的蚊虫叮咬后而感染,表现为西尼罗热或西尼罗脑炎。该病自1999年传入美国以来,已连续肆虐了六个流行季节,流行范围迅速扩大,感染人数逐年攀升,给美国社会造成了极大恐慌。目前,我国尚缺乏对WNV感染的系统研究。本研究应用免疫学与分子生物学技术,建立敏感、特异的WNV感染检测方法,并在我国开展WNV感染的流行病学调查。旨在了解WNV在我国的存在情况和潜在媒介蚊种及自然疫源地性质,为深入开展WNV相关研究和大规模疫源地调查奠定基础。 为证实引进的WNV毒株应用于相关研究的可行性,对病毒的致病性、细胞敏感性、形态学、免疫原性、分子生物学特征进行了探讨。结果表明:给乳鼠脑内接种WNV可致全部动物死亡;WNV可使Vero-E6细胞与C6/36细胞产生细胞病变效应(CPE),分别以细胞圆缩和细胞融合为主要特征;电镜下所见病毒体为有包膜、直径约30~50nm的球状颗粒;灭活病毒可诱导小鼠产生抗WNV抗体;采用RT-PCR对病毒C-prM区和E区部分基因片段进行扩增,在病毒培养液及感染乳鼠脑组织中均检测到目的核苷酸片段,经BLAST程序分析仅与WNV有较高的同源性。 进一步,对WNV和乙型脑炎病毒(JEV)的上述生物学性状进行了比较,结果显示:两种病毒在电镜下的形态、大小和对乳鼠的致病性相似;与WNV不同,JEV所致C6/36细胞CPE以细胞脱落为主要特征;WNV与JEV之间存在抗原交叉反应;用黄病毒通用引物可从WNV和JEV感染组织中检出病毒核酸,而用特异引物仅能扩增出相应病毒的核苷酸片段。 在WNV基因组C-prM区和E区设计3对特异引物,以病毒培养液为标本,


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