荧光定量PCR检测立克次体

【摘要】：立克次体是一类重要的专性细胞内寄生的人兽共患病原体,许多立克次体感染也属于新发和再发感染性疾病以及今后有可能出现的生物恐怖感染。建立系列快速检测立克次体病原体方法对于有效控制立克次体感染十分重要。 实时荧光定量PCR被认为是目前检测病原体的最快速的高特异和高敏感的新技术,已开始用于病毒、细菌等病原体的快速检测。我们根据贝氏柯克斯体、汉赛巴通体、五日热巴通体、查菲埃立克体、嗜吞噬细胞无形体等五种立克次体的特异性基因序列设计引物和探针,建立了检测这些立克次体病原体的种特异性的实时荧光定量PCR方法。与普通PCR相比较,这些实时荧光定量PCR的特异性为100%,敏感性是普通PCR的100倍,可检测少到10个以下的目的基因拷贝。 采用实时荧光定量PCR检测贝氏柯克斯体实验感染Balb/c小鼠的样本,可在感染后第一天的血样本中检测出目的基因,提示该荧光定量PCR检测可用于贝氏柯克斯体感染的早期诊断。用建立的检测贝氏柯克斯体的实时荧光定量PCR对贝氏柯克斯体感染的小鼠的脾脏等脏器标本进行了检测,显示脾脏立克次体的感染量与感染过程密切相关。用该荧光定量PCR分析贝氏柯克斯体攻击后的抗原免疫BALB/c小鼠的脾脏样本,结果显示免疫小鼠脾脏中的贝氏柯克斯体的感染量显著低于非免疫小鼠,二次加强免疫小鼠脾脏贝氏柯克斯体的感染量显著低于一次加强免疫的小鼠。这些结果说明该荧光定量PCR测定感染小鼠脾脏贝氏柯克斯体的载量可以准确分析小鼠的感染程度和评价候选Q热疫苗的免疫保护效果。 用汉赛巴通体特异性荧光定量PCR方法分析汉赛巴通体感染Balb/c小鼠的