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新型病原体的探索研究

潘文胜  
【摘要】:在科学飞速发展的今天,医学研究水平已经达到了很高的水平。但人们与感染性疾病的斗争一直没有停息,不断有新的病原微生物被发现和研究清楚,对新型病原体的研究一直是生物医学的热点话题。从生物进化的角度来说,人们不可能永远穷尽对病原微生物的研究,人类的肌体在与病原微生物的斗争中,相互依赖,相互促进,相互竞争,共同发展,呈现螺旋式的上升,这是所有生物发展的共同规律。所以,研究病原微生物对人体本身的研究和认识会有很大的促进作用。 对病原微生物研究的另一个意义在于其对人体的危害,在临床上许多病因不明的感染性疾病,由于其认识不清,往往给病人带来了巨大的痛苦和沉重的经济负担。并且这种不明原因的疾病有逐渐增多的趋势。 从理论上来说,新型病原微生物的研究有很大的难度,一方面是由于其目前医学研究的手段还达不到发现这样病原微生物的要求。人们不知道未知病原体的大小和结构有哪些特殊性,用已知的方法、知识和理论去研究它,必然有一定的盲目性;另一方面,可能一些病原微生物具有条件致性和自然疫源性,它根据一定气候环境、宿主肌体的状况、宿主的范围等而发生改变,它不是一个人群发生的疾病,在研究发病的因果关系上比较困难。 我们根据现有的条件,对一些可疑的病原微生物进行了研究,简述如下。 1.一株新型肠道病毒的鉴定 1986年我国新疆戊型肝炎爆发流行,我们用HepG-2细胞系从一例戊型肝炎患者的潜伏期和急性期粪便中分离到一株致细胞病变的病毒(XJ90),用免疫电镜观察,其病毒颗粒为球形,直径27~32nm,能被我国新疆、缅甸、前苏联和印度的戊型肝炎病人的急性血清特异性凝集和中和,而不能被甲型肝炎病人和正常人血清中和,用部分标准的肠道病毒组合血清(28个型),也不能被中和。理化实验证实为耐酸、耐乙醚、不耐热、无包膜的RNA病毒。但由于当时研究条件所限,未能对这株病毒全序列进行测定,所以不能明确其在分类学上的地位,不能肯定这株从戊型肝炎患者粪便中分离的病毒是否是戊型肝炎病毒。本研究利用分子生物学方法对XJ90病毒株的全序列进行了测定和分析,发现XJ90实际上是一株肠道病毒,而不是戊型肝炎病毒。 本研究的关键技术是rPCR(random PCR),它在新基因的研究中是一个快速而有效的工具,其基本原理是利用随机克隆的方法,优先克隆模板中高丰度的目的片段。rPCR采用了一个在3’端带有6个碱基的随机序列、5’端为20个碱基特定序列的引物,利用它进行反转录和合成双链,最后用5’端的特定序列的引物进行PCR扩增,从原理上说它可以将目的基因的所有片段进行有效的放大,以便进一步的克隆和分析。 我们用rPCR方法所产生的DNA片段中,随机挑选了12个克隆,经同源性比较分析发现它们都与肠道病毒的同源性最高,达到80%以上,它们分布在肠道病毒(约7.5kb)的大部分区段中。我们根据测定的12个片段的序列资料,在其5’和3’方向合成引物,扩增未知的空缺区段,便可获得一条完整的XJ90病毒株cDNA序列。 XJ90病毒株全基因序列cDNA全长共7443个核苷酸,编码一个长度2189个氨基


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