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HBx相互作用蛋白及HBV受体研究

张士猛  
【摘要】:HBx是HBV编码的一个具有反式激活活性的蛋白质,它极有可能参与HBV感染所诱发的肝硬化、肝癌等疾病。但是它参与诱发肝癌的分子机制并不清楚。在纯化大肠杆菌表达的GSTX融合蛋白时,发现它可以和大肠杆菌HSP60、HSP70形成复合体。随后的GST沉降、双向电泳和质谱分析发现GSTX也可以和人线粒体HSP60、HSP70形成复合体,免疫共沉淀的结果也证实了上述观点,这些结果会有助于解释HBx的功能。同时我们也采用酵母双杂交技术筛选到HBx的相互作用蛋白巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)。他们之间的相互作用被GST沉降、免疫共沉淀、细胞共定位等实验证实,MIF与HBx相互作用的结构与也被找到。MIF在分泌HBV颗粒的细胞系2.2.15中的表达比HepG2中明显被上调。HBx和MIF都可以引起HepG2细胞G_0/G_1周期阻滞,但是后者可以抑制前者的促细胞凋亡活性。这些结果可能成为HBV感染诱发肝癌的又一证据。 为了研究HBV感染的早期事件尤其是其受体,我们构建了基于HIV的HBV假病毒系统来进行研究。细胞定位、免疫沉淀及透射式电镜证实我们生产出了相应的假病毒。感染试验证明,只有含有PreS1结构域的的假病毒才可以感染原代肝脏细胞,说明PreS1结构域是HBV感染必不可少的而PreS2则可能不是必需的。另一个有趣的发现是HBV假病毒也可以感染肾脏293T细胞,这提示293T可能表达HBV的受体蛋白,或者还有其它的未知机制需要以后阐明。


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