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肝细胞生长因子转染的MSCs防治小鼠肠道移植物抗宿主病及其机理研究

黄雅静  
【摘要】:异基因造血干细胞移植是治疗恶性血液病最有效的方法之一,但是,由于供受者之间主要组织相容性复合体的不同,移植物抗宿主病(GVHD)的发生难以完全避免。GVHD可以影响多个器官,主要是皮肤、肝脏和肠道。重度肠道GVHD会加重全身GVHD,影响移植的疗效,增加病死率。肠道粘膜损伤能够通过加重GVHD时的炎性细胞因子风暴,因此,粘膜损伤修复和免疫调节是肠道GVHD治疗的关键。 肝细胞生长因子(HGF)对许多组织都具有修复作用,间充质干细胞(MSCs)不仅具有损伤修复作用,还具有免疫调节、促进造血恢复的作用,本实验建立小鼠异基因造血干细胞移植肠道GVHD模型;应用高表达HGF的MSCs(MSC-HGF)防治小鼠肠道GVHD,比较其与药物以及单独应用MSC防治GVHD之间的差异。 材料和方法Balb/c小鼠经5.5Gy照射后输注C57BL/6小鼠骨髓细胞及脾细胞建立小鼠肠道GVHD模型;分离培养、鉴定C57BL/6小鼠骨髓MSCs,应用脂质体法将质粒pcDNA3.1-HGF瞬时转染入MSCs,检测转染细胞HGF表达情况;实验组根据细胞输注时间(0d,+6d,+10d)和输注形式(MSC或MSC-HGF)的不同分为6组:MSCs-0d,MSC-HGF-0d,MSCs-6d,MSC-HGF-6d,MSCs-10d,MSC-HGF-10d;输注MSCs细胞数量为1×10~6/只:空白对照组未予GVHD预防与治疗,药物对照组采用环胞菌素(CSA,5 mg/kg/d,灌胃)和骁悉(MMF,40 mg/kg/d,灌胃)联合防治GVHD。比较移植后肠道GVHD的发生率和致死率,肠道病理损伤情况以及小鼠存活情况。检测细胞输注后受体小鼠T细胞亚群变化,CD4+CD25+T细胞比例变化,炎症相关细胞因子表达情况,以及肠道凋亡细胞变化。


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