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Pseudomonas sp.W2的双酚A降解基因与酶的研究

贾凌志  
【摘要】: 二十世纪90年代以来,环境内分泌干扰物污染日益引起了人们的关注。双酚A是其中重要的一种,用途非常广泛。近几年,双酚A在世界各地各种水体中都有发现,对双酚A污染的治理势在必行。目前对双酚A污染处理方法的研究多有报道,主要可分为吸附法、氧化法和生物降解法等。由于生物降解法自身特点,是最适合环境中污染双酚A的治理。人们已经报道从环境中分离到一些双酚A降解菌株,但有关双酚A降解基因和降解酶的研究却未见到。 在前一个阶段的研究中,我们已经筛选得到了一株高效双酚A降解菌株——Pseudomonas sp.W2,并鉴定了双酚A降解相关质粒pW2。本课题以此为基础,开展了双酚A降解菌Pseudomonas sp.W2的降解基因与酶的研究,并得到了如下结果: 1.质粒pW2的研究。构建质粒pW2全基因文库,对该文库进行了测序、分析和拼接,得到了一些DNA片断。利用PCR、prime walking等技术,对这些片断进行连接,得到质粒pW2的全序列。对pW2质粒基因组进行生物信息学解析。 2双酚A降解基因的研究。通过在美国国家生物技术信息中心(NCBI)相关数据库中比对分析,对于无相似序列且长度大于450bp的开放读码框进行表达研究,发现一个转化子具有双酚A降解活性,经分析认为该克隆包含的ORF为双酚A降解基因。随后,对该克隆的表达条件进行了研究。 3双酚A降解酶的研究。利用超声波破碎、硫酸氨分级沉淀方法,完成了酶的提取,并利用离子色谱与疏水色谱技术对酶进行了纯化。


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