收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

新型呼肠病毒BYD1株诱导细胞凋亡的分子机制及其与致病性关系的研究

段鸿元  
【摘要】: 2003年7月本实验室从SARS患者标本中分离得到1株新型呼肠病毒BYD1株[1]。这是继1982年国内报道分离出呼肠病毒21年后再次分离得到呼肠病毒[2]。与人类疾病相关的呼肠病毒以往曾经在婴儿和儿童病患体内分离得到,患者出现了致死性脑炎、致死性肺炎、间歇性发热、腹泻等症状[3,4,5,6]。尽管如此,一般认为该病毒对成人不致病,仅能造成隐性感染,没有明显临床症状。长期以来国内对该病毒研究甚少,已有的临床病例和基础研究的报道基本来自国外。自SARS患者标本中分离出BYD1株病毒后,已引起国内对该病毒的注意[7],同时本实验室对BYD1株病毒也开展了一系列研究[8,9,10]。 呼肠病毒与致病性相关的重要特征是某些毒株能够在体外诱导多种细胞系凋亡[11,12,13]。本论文将对BYD1株病毒诱导细胞凋亡的能力、诱导凋亡的分子机制、病毒致病性及凋亡和致病性之间的关系进行研究。 本研究用105TCID50的BYD1株病毒感染HeLa细胞,12h后用胰酶消化细胞致单个,采用碘化丙啶(PI)和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白(Annexin-V)对感染细胞进行染色,然后经流式细胞仪检测细胞凋亡率。通过成组资料的t检验分析,BYD1株病毒感染的HeLa细胞凋亡率为14.32±0.71,模拟感染细胞凋亡率为4.06±0.23,t值为26.69,大于t0.05。分析表明BYD1株病毒具有诱导细胞凋亡能力。 呼肠病毒在宿主细胞内复制一代所需时间不超过16小时[14],但本研究发现BYD1株病毒颗粒对凋亡的诱导早在感染后12小时就可以检测到,因此推测病毒对细胞凋亡的诱导发生在病毒复制完成之前。凋亡的发生可能不是由于病毒颗粒的复制,而是与病毒的某些蛋白分子有关。有研究指出,呼肠病毒结构蛋白σ1和μ1具有病毒诱导细胞凋亡的能力。μ1、σ3和σ1是呼肠病毒重要的外衣壳蛋白成份,它们参与病毒入侵宿主细胞的过程:呼肠病毒通过类似受体介导的内吞方式入侵到细胞浆后,σ3蛋白被降解。感染性亚病毒颗粒(infectious subvirion particles,ISVPs)形成,σ1蛋白构象随之发生改变,μ1蛋白也被裂解为与病毒颗粒相连的δ和φ片段[15,16,17]。然后病毒释放出完整的病毒核心,在胞浆中开始子代病毒复制。 为研究BYD1株病毒引起细胞凋亡的分子机制,本研究选取σ1全长基因、μ1全长基因、以及δ和φ基因片段,将其克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,构建成重组质粒pEGFP-C-σ1(1-461)、pEGFP-C-μ1(1-708)、pEGFP-C-μ1(1-675)和pEGFP-C-μ1(582-708)。然后将每一个重组质粒分别转染293T细胞。于转染后18h观察细胞病变状态;与转染后18h收获细胞用于细胞凋亡率的检测;于转染后48h收获细胞,用于电镜下的形态学分析。转染后18h,在普通光镜下可见宿主细胞出现明显病变,细胞边界不清楚、细胞皱缩、甚至破碎。同一病变细胞在荧光显微镜下可见有融合蛋白的表达。转染后48h,电镜形态学观察发现细胞出现了典型凋亡特征,可观察到处于凋亡早期、中期和晚期的细胞。用流式细胞仪检测转染18h的细胞凋亡率,并进行统计分析,发现BYD1株病毒σ1蛋白、μ1蛋白、以及μ1(1-675)和φ片段都具有诱导细胞凋亡的能力。实验结果显示,σ1蛋白、μ1蛋白、以及μ1(1-675)和φ片段是BYD1株病毒诱导细胞凋亡的重要决定因子,这些蛋白单独或相互作用来起始凋亡信号。 为研究新型呼肠病毒BYD1株的致病性与细胞凋亡的关系,本研究通过颅腔注射方式使2日龄乳鼠感染BYD1株病毒。每只乳鼠注射病毒原液20μl,逐日观察乳鼠发病情况。表征观察,乳鼠病程经历了急性发病期、缓和期以及症状二次加重的变化过程。 在注射病毒后第8天处死动物,取出脏器,制成石蜡包埋组织切片,对组织切片进行组织病理分析和TUNEL法原位凋亡检测。结果显示,BYD1株病毒感染可对乳鼠中枢神经、心脏和肺等全身多脏器产生损害,新型呼肠病毒BYD1株的感染与动物中枢神经损伤、心肌炎和肺炎的发病关系密切;TUNEL法原位细胞凋亡检测,感染乳鼠海马组织可见大量凋亡细胞,说明BYD1株病毒诱导的细胞凋亡是造成组织损伤的一个直接原因。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 花慧;冯磊;张小平;张莲芬;金坚;;合欢皂甙Julibroside J_8对人微血管内皮细胞凋亡的影响研究[J];天然产物研究与开发;2011年03期
2 马晓飞;张红;;高能~(12)C~(6+)离子辐照诱发小肠急性损伤研究[J];兰州大学学报(自然科学版);2011年04期
3 周臻;张绍丹;李颖;张纯;王薇;;Müller细胞在视网膜绿光损伤模型中的激活反应[J];中国实验动物学报;2011年04期
4 张思楠;伍春莲;陈杨琼;孙警辉;耿文峰;杨军;;茶多酚诱导卵巢癌COC1细胞凋亡的研究[J];西华师范大学学报(自然科学版);2011年02期
5 李清;王晓宇;金英花;;人参皂甙Rh2和桦木酸协同诱导A549细胞凋亡的研究[J];辽宁师范大学学报(自然科学版);2011年02期
6 汪纪仓;孙娅;宋瑞龙;卞建春;刘宗平;;钙离子超载在镉致大鼠肝细胞凋亡中的作用[J];畜牧兽医学报;2011年08期
7 张广智;胡长敏;陈颖钰;刘颖;李帅;罗雨;王金勇;郭爱珍;陈焕春;;细胞凋亡的主要检测方法研究进展[J];动物医学进展;2011年08期
8 高超;华子春;;细胞凋亡检测方法新进展[J];中国细胞生物学学报;2011年05期
9 洪雅丹;刘学红;;细胞凋亡与脊髓发育的关系研究进展[J];绍兴文理学院学报(自然科学);2011年02期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周元陵;范卫;朱瑞娟;王继光;金复生;;丙烯腈对大鼠脑组织形态学及神经细胞凋亡的影响[A];中国毒理学会第四届全国学术会议论文(摘要)集[C];2005年
2 盛艳;杨亚波;陆勤康;;准分子激光原位角膜磨镶术后角膜基质细胞凋亡的实验研究[A];2005年浙江省眼科学术会议论文集[C];2005年
3 施益芬;俞康;;再生障碍性贫血血清抑制物诱导骨髓基质细胞的Fas表达及凋亡[A];2006年浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2006年
4 徐丽;孙圣刚;;蛋白酶体抑制剂诱导细胞内泛素化α-synuclein聚集选择性损伤多巴胺神经元[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年
5 梁鹏飞;黄晓元;蒋碧梅;张丕红;杨兴华;龙剑虹;;TNF-α诱导Hacat细胞凋亡的实验研究[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
6 吴思荣;惠国桢;李向东;祁震宇;王之敏;胡锦;俞文华;王清;;大鼠创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的动态变化及其与caspase-3基因表达的关系[A];《中华急诊医学杂志》第七届组稿会论文汇编[C];2008年
7 冯志杰;于洪海;刘迎迎;;P物质在大鼠急性胰腺炎肝损伤中的作用[A];第二十次全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2008年
8 赵亚锋;郭淮莲;程敏;;脑缺血再灌注大鼠腹腔注射ANG后缺血半暗带凋亡细胞数目的变化[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
9 刘小红;赵永利;徐曼;邢军卫;周熙惠;王燕;谭璐;;高压氧干预对缺氧缺血脑损伤新生大鼠脉络丛的影响[A];西北五省(区)第六届儿科学术交流大会论文汇编[C];2008年
10 田国庆;郭赛珊;卢贺起;;补肾活血方对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的影响[A];中医药优秀论文选(上)[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 段鸿元;新型呼肠病毒BYD1株诱导细胞凋亡的分子机制及其与致病性关系的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
2 齐军元;骨髓增生异常综合征细胞凋亡的研究[D];中国协和医科大学;1999年
3 安立峰;特异性的抑制AQP1对喉癌细胞的生长抑制作用[D];吉林大学;2007年
4 孙巍;蒺藜皂苷对心肌缺血的保护作用及其分子机制研究[D];吉林大学;2007年
5 龙新兵;平衡针疗法对颅脑损伤急性期影响的研究[D];广州中医药大学;2007年
6 白宇;白藜芦醇对人膀胱癌T24细胞的抑制作用及其机制研究[D];浙江大学;2008年
7 陈琰;外源性PUMA表达增加HPV阳性宫颈癌放疗敏感性的体外研究[D];中国协和医科大学;2008年
8 冯雪莹;小鼠巨噬细胞吞噬凋亡细胞的炎症调节及性别差异[D];北京协和医学院;2011年
9 孙颖;SARS患者临床标本中脊髓灰质炎病毒及呼肠病毒的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
10 张文瑾;早期凋亡细胞炎症及免疫抑制性质的实验研究[D];浙江大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘海洋;内质网应激参与视网膜脱离后细胞凋亡的研究[D];上海交通大学;2007年
2 张仁民;纳秒级高压陡脉冲装置及其诱导肿瘤细胞凋亡效应的研究[D];重庆大学;2007年
3 孙臻峰;雷诺考特致鼻息肉成纤维细胞凋亡的实验研究[D];第二军医大学;2007年
4 王鹏;克罗卡林对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究[D];青岛大学;2009年
5 麻小浩;ADFMChR对人肺癌A549细胞生长和凋亡的影响[D];湖南师范大学;2009年
6 兑宏志;盐酸戊乙奎醚对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧/复氧后凋亡的影响[D];第四军医大学;2009年
7 刘胜勇;9-顺式维甲酸和维生素D3对神经母细胞瘤细胞系体外生长的协同抑制作用[D];安徽医科大学;2009年
8 韩慧敏;肿瘤坏死因子(TNF-α)对耐药肿瘤细胞凋亡诱导作用的研究[D];大连医科大学;2007年
9 张帆;熊果酸诱导人胃癌BGC-803细胞凋亡及机制研究[D];内蒙古医学院;2007年
10 季恩;莲必治注射液致SD大鼠肾毒性的实验研究[D];昆明医学院;2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陆文;凋亡细胞 被挤出上皮组织[N];医药经济报;2002年
2 洪敏;细胞凋亡研究引人关注[N];中国医药报;2008年
3 吴一福;广东惠州学院实验表明:黄芪注射液可改善腹透疗效[N];中国医药报;2005年
4 张中桥;陕西姜黄素对A549细胞有生长抑制作用[N];中国医药报;2005年
5 张中桥;研究证明:姜黄素对人肺腺癌细胞有生长抑制作用[N];中国中医药报;2005年
6 仲海亮;香加皮水提取物具抗肿瘤功效[N];中国医药报;2006年
7 严少慰;查游离DNA 肺癌有望早发现[N];健康报;2008年
8 聂兴草 方峰 李红;大蒜新素可抑制HCMV诱导的细胞凋亡[N];中国医药报;2005年
9 刘道安;“针刺影响衰老”课题通过专家鉴定[N];中国中医药报;2004年
10 康 旭 冼沛中 许庆文;复方苦参注射液促使大肠癌细胞凋亡的实验研究[N];中国中医药报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978