收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

我国土拉弗氏菌分子流行病学调查研究

张芳  
【摘要】: 土拉菌病又称“野兔热”,是由土拉弗氏菌引起的一种自然疫源性疾病,呈世界性分布。该菌具有传播途径多样(可经患病野生动物、吸血昆虫或遭受污染的水、食物及空气传播)、感染剂量低、致病性强的特征,因此被列为与鼠疫、炭疽等同列的A类恐怖源。土拉弗氏菌在自然界的宿主主要包括节肢类和哺乳类动物,如:蜱类、野兔类、鼠类等。在中国,土拉弗氏菌最早于1957年从黄鼠体内分离得到的。1959年黑龙江省报道了第一起人间感染“野兔热”。随后证实西藏、新疆、甘肃等地也存在土拉菌病的自然疫源地,从上述地区“野兔热”患者、蜱、野兔及野鼠等体内均分离到了病原菌。自1986年,在山东某肉类加工厂爆发了人间“野兔热”后,有关“野兔热”的病例及自然状态下宿主动物感染土拉弗氏菌的相关研究在中国未见报道。目前尚不清楚是否以往自然疫源地已经消失或处于静止,还是由于没有报道?此外,该病许多流行病学特征如媒介及宿主动物感染情况、疫源地变化情况、基因型别差异等目前仍不清楚;同时目前在我国尚缺乏快速简便的病原体甄别技术,这使得在疾病发生时,对病原体的来源追踪及准确判断疾病是自然发生还在认为人为施放无法实现。 针对上述问题,本研究首先对我国北方部分地区(新疆、内蒙古、黑龙江、吉林)及两个南方省区(福建、浙江)进行了分子流行病学调查研究。利用巢式PCR的方法,对来自调查点的蜱标本及野鼠标本进行检测,然后利用亚种鉴别引物对阳性标本进行亚种确定,同时随机选取标本进行测序加以验证。结果显示,蜱的感染率为1.98% (33/1670),其中全沟硬蜱和草原革蜱为主要的媒介;野鼠的感染率为4.76% (20/420),其中在检测的14个鼠种中,共有7个鼠种感染,尽管花鼠和大仓鼠具有最高的阳性率,但未发现鼠种间感染率的差异。亚种鉴别显示:所有感染均为土拉弗氏菌B亚种。在研究中的南方两个省区标本中未发现媒介及宿主动物感染土拉弗氏菌的证据。 同时,在实验室建立起目前公认的3种分析方法即AFLP、PFGE和MLVA分析方法,并对上述方法逐一进行分析与评价。AFLP的研究结果显示:45对引物组合中,3对选择性引物能将西藏的2株分离株与其他分离株鉴别出来,但对其他菌株显得无能为力,同时在测序中发现,在土拉弗氏菌基因组中存在重复序列,因此AFLP法并不适用于土拉弗氏菌的快速鉴别。PFGE研究显示:在使用的7种内切酶中,BamHI和XhoI具有较好的鉴别效果。XhoI酶切后产生大约20条不同大小的条带,大小在20~100 kb之间,受试菌株条带数目一致,片段分布一致。BamHI酶切后,可产生大约15条DNA片段,其范围从27~330 kb,酶切后片段存在差别,产生的条带数目和大小均有所区别,能将同一地区来源的菌株相互区别开来。MLVA法研究显示:在运用的25个位点中,重复位点片段从2 bp—23 bp。其中Ft-M3位点是一9 bp的重复单元,有5种不同的序列组合,中国菌株序列组合为9A及9E两种。菌株在此位点存在7种不同的基因型,此位点虽然存在不同的序列组合,但其并不影响氨基酸的排列。在M-4,20,21,22,24位点存在2-3种不同的基因型,其余位点均只有一种基因型;Ft-M5及Ft-M7-10代表的是5个16 bp的重复单元,这5个重复单元位于土拉弗氏菌插入子单元中,虽然在已报道的研究中显示这5个位点的多态性程度很高,但在本研究中,在中国菌株中并未显示出这一特点,所有实验菌株均具有相同的片段大小及拷贝数。Ft-M19位点的重复序列位于30- bp的缺失位置,在土拉弗氏菌B亚种的菌株中表现为缺失,因此也常用来鉴别A、B亚种。分别计算25个位点的多样性指数,其中以Ft-M3的多样性指数最高,达到0.91,Ft-M4位点为0.50, Ft-M6为0.62, Ft-M20为0.35, Ft-M21为0.44, Ft-M22为0.34, Ft-M24为0.52。而其他位点在中国菌株中不具有多样性,但需注意的是Ft-M1及Ft-M25这两个位点,我国菌株在这两个位点存在19和7这种类型,而报道的均为3和5。分析其基因序列发现,两位点拷贝数的差异已经影响到的氨基酸的排列,此种改变能否造成菌株在致病性及毒力等方面的改变无法得知。 利用已经建立起来的MLVA法,对中国不同来源的分离株和阳性标本进行基因分型研究。不同来源的分离株分析显示:利用25个位点的基因序列分析,可将菌株分为个不同5个群,即新疆群、西藏群、内蒙群、黑龙江群及疫苗株群,而这与该病在我国疫源地的分布情况基本一致。5个群中以西藏群为基础,新疆群为主干,由此产生疫苗株群、内蒙群和黑龙江群。同时以菌株不同位点的拷贝数为基础,转化为距离距阵,利用距离距阵构建系统发育数,分析菌株间的相互关系,结果将菌株分为2个大群即新疆群和西藏群。而黑龙江、内蒙的分离株处在西藏群中,而疫苗株处于新疆群中。上述结果与序列分析的结果一致。利用A亚种及B亚种代表株及来自瑞典、日本、美国等国家菌株的MLVA数据综合比较发现,我国大部分菌株与瑞典的分离株较为接近,但部分菌株与A亚种菌株接近,值得注意的是在我国菌株中存在与日本分离株相近的菌株,而越来越多的研究显示:日本分离株与已知的土拉弗氏菌4个亚种差别较大,甚至有学者提出日本分离株应代表新的一个亚种。利用6个具有多样性的MLVA位点,对检测阳性的标本进行基因型别分析发现一种在蜱标本中普遍存在的基因型别,综合分析发现标本中土拉弗氏菌的基因型别存在物种的差别,但未发现地域特异性的特点。 对我国北方部分地区进行了土拉弗氏菌的分子流行病学调查研究,发现以往的疫源地并没有静止或消失,确定了土拉弗氏菌在我国的主要媒介为全沟硬蜱及草原革蜱;建立了以PFGE和MLVA为基础的我国土拉弗氏菌鉴别方法,确定了以MLVA为基础的中国菌株快速甄别的方法;利用建立的MLVA了解了我国土拉弗氏菌的基因型别特征及与国外菌株间的关系;同时通过本研究,建立了与国际土拉弗氏菌知名实验室相互合作的关系。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 翟俊辉;;土拉热弗氏菌的分离鉴定、免疫学及分子生物学研究进展[J];国外医学(微生物学分册);1997年02期
2 严善明;;《占有与融入》读后[J];临床精神医学杂志;1996年02期
3 贺才标;;婴儿弗氏枸橼酸盐杆菌性脑膜炎1例[J];中国医师进修杂志;1988年06期
4 霰明理;王寿谦;刘广顺;张文华;陈祥福;马庆沂;李培平;孙会萍;宋德香;刘炫玉;;临朐冷藏厂土拉弗氏菌病血清学调查分析[J];中国公共卫生;1989年06期
5 米洪俊;王文华;周敖齐;;青海柴达木盆地土拉弗氏菌病疫源地调查初报[J];青海医药杂志;1981年02期
6 郭安荣;唐登明;;我国土拉弗氏菌病的流行概况[J];人民军医;1989年05期
7 张永洛;;中医理论中的弗氏心理学方法[J];中医药学报;1990年06期
8 С.И.Бердыева;仇素英;;茶对弗氏痢疾杆菌的作用[J];山东医药;1957年03期
9 何裕民;;弗洛依德与中医学[J];医学与哲学(人文社会医学版);1992年05期
10 宫英;逄增昌;强新;;土拉弗氏菌病的研究进展[J];预防医学论坛;2006年01期
11 郭符则;;蚌埠市痢疾菌型调查报告(1953—1983年)[J];淮海医药;1984年02期
12 朱道宏;康新民;张毅;武茹怡;李俐;;宁夏石嘴山地区土拉费氏菌病自然疫源地初步调查[J];宁夏医学杂志;1991年05期
13 А.Д.Жерикова;姚凤一;;宋內氏痢疾的某些流行病学特性[J];山西医药杂志;1958年03期
14 彭求烈;;伤口的弗氏痢疾杆菌感染[J];国际流行病学传染病学杂志;1975年02期
15 许德本;;用弗氏2a516株活痢疾菌苗免疫治疗急性和慢性痢疾[J];国际生物制品学杂志;1982年04期
16 章华;;从7例莱姆病病人的血液分离出伯多弗氏疏螺旋体[J];国外医学.内科学分册;1990年06期
17 徐建农;弗氏按蚊和赫氏按蚊的鉴别:杂交、多线X染色体频率及核糖体DNA限制酶切片段三种方法的比较[J];国际医学寄生虫病杂志;1992年04期
18 金泽豫;张春震;;弗氏痢疾杆菌病并发败血症及肠穿孔一例[J];中国医刊;1965年04期
19 李俐;韩藕儿;;豚鼠土拉弗氏菌菌血症的形成及蜱感染试验[J];军事医学科学院院刊;1990年01期
20 高树仁;;弗氏痢疾杆菌引起急性肾盂肾炎[J];江西医药;1963年04期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 张效良;李随院;向敏;;弗氏虫霉种下型的研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
2 张效良;李随院;霍绍棠;;棉蚜体表微生物对弗氏虫霉侵染的影响[A];全国生物防治学术讨论会论文集[C];1991年
3 唐歌云;;弗氏虫霉深层培养的研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
4 郝贵杰;沈锦玉;潘晓艺;尹文林;曹铮;;哈维氏弧菌GYC1108-1胞外蛋白酶的制备及免疫原性研究[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 陈帅印;幽门螺杆菌ureB基因在乳球菌中食品级表达及免疫反应性[D];郑州大学;2010年
2 吴韦因;IL-1RⅡ重组质粒导入对大鼠实验性自身免疫性心肌炎的治疗作用[D];福建医科大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 雪潇;《麦积悲歌》的救赎主题[N];天水日报;2010年
2 阿渝;阿根廷鱼类上岸量下降[N];中国渔业报;2009年
3 谷亚光;经济增长与道德是什么关系[N];中国改革报;2009年
4 石峰 贵州师范大学历史与政治学院;西方人类学汉人社会研究的基本脉络与新动向[N];中国社会科学报;2009年
5 大学教师 周树良;正当的政府伦理是医改的推力[N];东莞日报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978