收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

槲皮素及其糖苷在Caco-2细胞模型上的吸收和代谢研究

李素云  
【摘要】: 在参考有关文献的基础上,本研究构建了体外人类肠吸收模型Caco-2细胞模型,对槲皮素及其主要糖苷在Caco-2细胞模型上的吸收、代谢过程以及相关机制进行了研究,为进一步深入了解槲皮素及其主要糖苷在体内的吸收、代谢过程以及生物利用度等提供实验依据。 本研究主要完成了下面六个方面的工作,主要结果如下: 1、建立了Caco-2单层细胞吸收及外排模型,优化了相关的实验条件。同时,应用P-gp特异性抑制剂CysA和MRP2特异抑制剂MK571,对受试物与P-gp和MRP2的相互作用进行了考察,结果与预期实验一致,证明该模型可靠。 2、摸索了细胞孵育的相关实验条件,建立了样品处理方法和LC/MS检测方法。通过模拟细胞孵育环境,确定实验中细胞孵育时间不超过2.5h;受试物负载量浓度低于100?g/ml时,细胞抑制率均小于5%,对细胞的活性状态没有影响,能够满足实验要求。对含有槲皮素及其糖苷以及甲基化代谢物的PBS溶液,经过一定比例稀释后,可以直接采用LC/MS法测定,方法灵敏度高,线性良好,可以满足本研究的需要。 3、考察了槲皮素及其糖苷在Caco-2单层细胞模型上吸收特征。槲皮素在Caco-2细胞单层上的跨膜双向转运,不同浓度各时间点均能在透过面检测到槲皮素,且存在浓度、时间依赖性动态变化,B→A的透过量高于A→B,大约是A→B的2.2倍;加载侧槲皮素的减少也存在浓度、时间依赖性;以两侧槲皮素量的变化做标准计算表观渗透系数(Papp),负载面得到的Papp(A→B)和Papp(B→A)分别是透过面的24倍和8倍左右,负载面槲皮素减少和透过面检测到槲皮素之间相差10倍以上,90%以上的槲皮素在跨膜转运过程中消失,提示槲皮素在跨膜转运过程中可能发生了广泛的代谢和转化。槲皮苷和异槲皮苷在Caco-2单层细胞模型上也存在着双向跨膜转运,并存在浓度、时间依赖性的动态变化,A→B的透过量高于B→A,Papp(A→B)/Papp(B→A)比值,槲皮苷1.38,异槲皮苷2.24,按透过面的测定量计算,150min时槲皮苷的双向透过率分别为5.1%和2.9%,异槲皮苷的双向透过率为5.3%和2.7%。这一结果表明槲皮苷和异槲皮苷均能直接透过Caco-2单层细胞,提示在Caco-2细胞表面可能存在直接摄取槲皮苷和异槲皮苷的转运蛋白,同时也存在跨膜转运过程中的代谢和转化。 4、探讨了SGLT1和GLUT2对槲皮素及其糖苷在Caco-2单层细胞模型上吸收中的作用。不同浓度葡萄糖对槲皮素的跨膜转运均有明显抑制作用,但没有表现出浓度依赖性,说明槲皮素和葡萄糖可能通过竞争性结合转运蛋白而非共转运的方式转运,且是以苷元的形式而不是以与葡萄糖结合成糖苷的形式与转运蛋白结合,非浓度依赖性则间接提示了转运载体的转运可能具有饱和作用;根皮苷对不同浓度槲皮素的跨膜转运的影响与葡萄糖相似,提示了SGLT1在槲皮素跨膜吸收中的作用;根皮素的影响与根皮苷不同,其显著增加了槲皮素A→B和B→A的双向透过率。根皮苷和根皮素对槲皮苷的跨膜转运有明显的抑制作用,提示SGLT1和GLUT2可能同时参与了槲皮苷的跨膜转运作用;根皮苷和根皮素对异槲皮苷的作用不同,120min内根皮素没有表现出明显的抑制作用,150min时明显上调了异槲皮苷的透过率,而根皮苷对异槲皮苷的作用与之相反,120min内抑制作用显著,150min时抑制作用消失,提示不同的糖基配体对槲皮素糖苷在Caco-2单层细胞上的吸收和/或代谢会有一定程度的影响。 5、研究了解了P-gp和MRP2对槲皮素及其糖苷在Caco-2单层细胞模型上吸收的作用。P-gp抑制剂CysA和MRP2抑制剂MK571可显著提高对侧面槲皮素浓度,提示槲皮素是P-gp和MRP2的底物。CysA和MK571对槲皮苷和异槲皮苷均没有表现出明显的抑制作用,提示二者可能不是P-gp和MRP2的底物。 6、分析了槲皮素及其糖苷在Caco-2细胞模型上的代谢产物。在孵育30-150min时间内,槲皮素孵育组的两侧孵育液中均检测到了槲皮素的甲基化产物-异鼠李亭和柽柳黄素,其中异鼠李亭含量约是柽柳黄素的1.5-2.0倍,二者总计含量不超过透过面测到槲皮素的10%和负载面减少量的1%,提示在跨膜转运过程中槲皮素的甲基化作用只是胞内代谢的中间环节,应该仍然存在其他的和进一步的代谢转化;两侧含量的动态变化均具有时间依赖性,90-120min时达峰值,随后呈下降趋势;在槲皮素的双向转运中,A→B的A面异鼠李亭含量明显高于B侧,B→A转运中,30min时B侧异鼠李亭高于A侧,60min以后各时间点,A面含量均高于B侧面;柽柳黄素在A、B两面的分布特征与异鼠李亭相似,提示甲基槲皮素可能是Caco-2细胞顶侧面外排蛋白的底物,且在基底侧也存在胞外的槲皮素甲基化反应。对槲皮素及其糖苷的代谢产物进一步分析后发现,除了异鼠李亭和柽柳黄素外,其他可能的代谢产物尚有槲皮素一硫酸酯(m/z 383→301,153)、槲皮素三硫酸酯(m/z 543→153)、槲皮素葡萄糖醛酸(m/z 479→153)、槲皮素葡糖醛酸化硫酸酯(m/z 559→153)、甲基槲皮素硫酸酯(m/z 397→301,153)和甲基槲皮素葡萄糖醛酸(m/z 493→301,153)。槲皮苷和异槲皮苷孵育后除了检测到微量的甲基化代谢产物外,均未检测到其它代谢产物。 综上所述,槲皮素及其糖苷均可以原型形式直接透过Caco-2细胞单层,并在跨膜吸收过程中发生广泛的代谢转化,但槲皮素糖苷的透过和代谢速度较槲皮素苷元缓慢;在细胞中的代谢产物主要为甲基化、硫酸化和葡萄糖醛酸的一级代谢产物。SGLT1是槲皮素及其两个糖苷在肠道吸收中的转运蛋白之一,同时槲皮苷也通过GLUT2转运吸收,GLUT2在槲皮素和异槲皮苷的跨膜吸收过程中的作用仍有待进一步研究。槲皮素是P-gp和MRP2的底物,存在外排现象,而槲皮苷和异槲皮苷的跨膜吸收不受P-gp和MRP2外排作用的影响。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前14条
1 李素云;李峥;李敬来;高蔚娜;张振清;郭长江;;槲皮素及其糖苷衍生物在Caco-2单层细胞上的吸收特征[J];营养学报;2012年04期
2 杨希;顾政一;沙先谊;贺金华;方晓玲;;金丝桃苷在Caco-2细胞模型中的跨膜转运方式[J];中国临床药学杂志;2012年02期
3 金莹;于锋;;Caco-2细胞模型考察不同转运蛋白对瑞香素口服吸收的影响[J];中药药理与临床;2012年01期
4 廖晓欢;王俊俊;韩凤梅;杜鹏;陈勇;;氢氯噻嗪在Caco-2细胞模型中的体外转运研究[J];湖北大学学报(自然科学版);2010年02期
5 崔升淼;赵春顺;何仲贵;;葛根素在Caco-2细胞模型中的吸收特性[J];中草药;2007年06期
6 单进军;沙先谊;方晓玲;吴皓;狄留庆;;祖师麻甲素在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究[J];中国新药杂志;2009年22期
7 王爱萍;周萍;张涛;潘海滔;钦博;徐人杰;;坤复康片中芍药内酯苷在Caco-2细胞模型中的吸收特征研究[J];中国现代应用药学;2022年01期
8 谢莉;田莉;张慧慧;高晓黎;;Caco-2细胞研究石榴皮中活性成分鞣花酸的摄取特性[J];食品科技;2016年02期
9 吴隽松;刘建;;阿司匹林对人结肠癌耐药细胞株Caco-2增殖和凋亡的影响[J];中国老年保健医学;2014年06期
10 柳睿;金晶;苟晓莉;周子懿;蔡业峰;黄民;;野黄芩苷对Caco-2细胞中P-gp蛋白表达及活性的影响[J];中国药师;2015年04期
11 王昆;贾银平;朱攀;方瑶;李倩;唐彬;李娜;毛旭虎;;具核梭杆菌诱导的肠上皮细胞Caco-2炎症反应及凋亡[J];免疫学杂志;2015年04期
12 罗明琍;黄松;吴新荣;;根皮苷和3-羟基根皮苷在Caco-2细胞单层模型中的转运与吸收研究[J];中国药房;2013年21期
13 王瑞;于彤;褚延乐;王琳茜;李晓天;;关附壬素在Caco-2细胞上的摄取特性研究[J];中国实验方剂学杂志;2013年16期
14 成日华;吴芬;李焕德;;枸杞多糖对Caco-2细胞P-糖蛋白作用的影响[J];中南药学;2012年07期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 李素云;李峥;李敬来;高蔚娜;张振清;郭长江;;槲皮素及其糖苷衍生物在Caco-2单层细胞模型上吸收特征的比较研究[A];第13届全国临床营养学术会议资料汇编[C];2011年
2 廖晓欢;王俊俊;韩凤梅;杜鹏;陈勇;;氢氯噻嗪在Caco-2细胞模型中的体外转运研究[A];中国化学会第十五届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文集[C];2009年
3 韩丽妹;施雯;王建新;;银杏内酯在Caco-2细胞中的摄取、转运研究[A];2009全国中药创新与研究论坛学术论文集[C];2009年
4 李鹏成;叶小兰;王志胜;庾庆华;杨倩;;乳酸杆菌S-层蛋白对鼠伤寒沙门氏菌黏附及入侵Caco-2细胞的作用[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
5 葛月宾;王丽君;廖矛川;;Caco-2细胞中8-羟基二氢小檗碱和小檗碱对多药耐药基因表达的研究[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年
6 蔡慧珍;史美琪;杨晓辉;;枸杞多糖对Caco-2细胞转运葡萄糖的影响[A];第十二届全国营养科学大会论文汇编[C];2015年
7 鄢良春;刘青春;赵军宁;易进海;;小柴胡汤基于Caco-2细胞模型的代谢产物初步研究[A];2013全国中药与天然药物高峰论坛暨第十三届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C];2013年
8 袁建敏;谢岩岩;周向梅;呙于明;王忠;;油酸和亚油酸对CaCo-2细胞增殖和分化的影响[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
9 韩雪;陈奇;薛佳;胡扬;;Caco-2细胞模型在中药口服吸收及机制研究中的应用[A];2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C];2009年
10 韩雪;陈奇;薛佳;胡扬;;Caco-2细胞模型在中药口服吸收及机制研究中的应用[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
11 李素云;李峥;李敬来;刘晋;郭长江;张振清;;Caco-2细胞中槲皮素代谢的初步研究[A];第九届全国药物和化学异物代谢学术会议论文集[C];2009年
12 张明秋;雷激;黄承钰;岳向峰;;体外消化/Caco-2细胞模型评价生物强化玉米铁生物利用率[A];“全国老年营养学术研讨会”暨“四川省营养学会成立二十周年庆祝会”会议录[C];2008年
13 张明秋;谢传晓;雷激;律焱;黄承钰;;体外消化/Caco-2细胞模型评价玉米铁生物利用率的有效性验证[A];“全国老年营养学术研讨会”暨“四川省营养学会成立二十周年庆祝会”会议录[C];2008年
14 叶小兰;李鹏成;杨倩;;枯草芽孢杆菌拮抗病原菌粘附和入侵Caco-2细胞的研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
15 王周丽;张春歌;俞洋;张学农;;蛇床子素及其制剂在Caco-2细胞模型中的转运机制研究[A];第十一届全国青年药学工作者最新科研成果交流会论文集[C];2012年
16 鄢良春;刘青春;赵军宁;毕岳琦;易进海;;小柴胡汤在Caco-2细胞模型的转运机制研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
17 黄怡;黄琴;李卫芬;余东游;周绪霞;;鼠李糖乳杆菌对Caco-2细胞抗氧化功能和细胞因子分泌的影响[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(上册)[C];2010年
18 邱峰;郑姣妮;龙潇鸿;邱宗荫;;蜕皮甾酮在Caco-2细胞模型中的摄取、跨膜转运及外排研究[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
19 黄怡;李雅丽;黄琴;余东游;崔志文;李卫芬;;屎肠球菌对Caco-2细胞和RAW264.7细胞先天免疫应答的调节[A];生态环境与畜牧业可持续发展学术研讨会暨中国畜牧兽医学会2012年学术年会和第七届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会会议论文集——T07家畜微生态与健康养殖专题[C];2012年
20 苑振亭;王可;赵中华;;蛇床子素在Caco-2细胞模型中的转运机制研究[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前14条
1 李素云;槲皮素及其糖苷在Caco-2细胞模型上的吸收和代谢研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
2 高晨;纳米氧化铜在Caco-2细胞模型及鸡肠道中吸收转运机制的研究[D];吉林大学;2014年
3 赵璐;仙茅苷抗骨质疏松作用机制及其在Caco-2小肠模型上的吸收特性研究[D];上海交通大学;2016年
4 邵玉新;锌营养对肉鸡肠黏膜及Caco-2细胞肠上皮屏障功能的作用及机制[D];中国农业大学;2017年
5 李晓丽;Caco-2细胞对不同形态锰的吸收及机制研究[D];中国农业科学院;2013年
6 马天翔;红景天中苷(苷元)类成分的抗辐射活性及其在Caco-2模型中的转运机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年
7 王丽玮;银屑病患者肠道菌群多样性分析及酿酒酵母菌对肠上皮细胞Caco-2及巨噬细胞THP-1免疫反应影响探究[D];北京协和医学院;2020年
8 贾晓燕;氨基多糖纳米微粒在Caco-2细胞模型中的吸收机制及其在荷瘤小鼠体内分布的研究[D];浙江大学;2009年
9 黄琴;芽孢杆菌影响Caco-2、RAW264.7细胞及小鼠免疫功能的研究[D];浙江大学;2012年
10 谢旭华;NOD2基因在U937和Caco-2细胞对金黄色葡萄球菌炎性反应的作用研究[D];华中科技大学;2011年
11 李秋霞;白术黄芪方、白术AMPS-Ⅱ、黄芪注射液对Caco-2单细胞层屏障影响的实验研究[D];广州中医药大学;2006年
12 董宇;戊己丸不同配伍的肠吸收特征及与P-gp相互作用研究[D];中国中医科学院;2008年
13 胡章雪;Zonulin在动脉粥样硬化发病机制中的作用研究与甘氨鹅脱氧胆酸细胞毒性的体外实验研究[D];第三军医大学;2013年
14 王立平;瑞士乳杆菌酪蛋白源活性肽制备及其生理功效研究[D];北京林业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 何翊;槲皮素及其衍生物在Caco-2细胞模型上的吸收机制的研究[D];南昌大学;2015年
2 佐艳秋;基于Caco-2模型的茶叶中多酚类物质转运研究[D];安徽农业大学;2017年
3 陶淼;基于2D和3D Caco-2细胞培养研究纳米氧化锌的安全性[D];中国计量大学;2016年
4 田蒙蒙;不同壁材和芯材脂质体的消化特性及其对Caco-2细胞的影响[D];浙江工商大学;2018年
5 闫文丽;姜黄素在大鼠单向肠灌流模型和Caco-2细胞模型中的吸收机制研究[D];广州中医药大学;2012年
6 赖戈娜;猪苓多糖指纹图谱分析及在Caco-2细胞单层中的吸收特征研究[D];广州中医药大学;2020年
7 姜凤洁;灯盏乙素及其苷元L-氨基酸氨基甲酸酯类衍生物的合成,Caco-2细胞吸收潜性以及体外抗氧化活性研究[D];贵阳医学院;2014年
8 康天舒;不同粒径纳米氧化锌对结肠腺癌Caco-2细胞的毒性作用研究[D];中国计量学院;2014年
9 宋玲玲;羟丙基-β-环糊精/胰岛素在Caco-2细胞模型上的吸收及药效学研究初探[D];南京师范大学;2011年
10 热西旦木·托乎提;锁阳体外抑制Caco-2细胞活性部位化学成分及其质量研究[D];新疆医科大学;2011年
11 党庆玲;基于Caco-2细胞单层模型研究花色苷的吸收机理及转运特性[D];江苏大学;2020年
12 马洁清;乳铁蛋白纳米脂质体的制备及其对Caco-2细胞活性影响的研究[D];中国计量学院;2013年
13 宋益娟;食品包装材料中纳米银对肠上皮细胞(Caco-2)安全性的研究[D];中国计量学院;2014年
14 徐俊科;不同长链脂肪酸在Caco-2细胞中转运及机制研究[D];华中农业大学;2014年
15 毛人杰;鹰嘴豆芽提取物诱导Caco-2细胞凋亡作用机制的研究[D];新疆医科大学;2011年
16 张燕;在体单向肠灌流与Caco-2细胞模型研究黄连解毒汤主要指标成分及其在复方配伍环境中的肠吸收机理[D];南京中医药大学;2012年
17 何丹;甘草提取物及其三种主要成分对Caco-2细胞膜上P-gp功能和表达的影响[D];中南大学;2010年
18 张丹;基于Caco-2细胞模型的苹果多酚多靶点抗肿瘤作用机制研究[D];渤海大学;2021年
19 丁涛;灰树花多糖的FITC荧光标记及Caco-2细胞模型对其的吸收与转运研究[D];江苏师范大学;2014年
20 张燕琴;6,8-二—三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素在Caco-2模型的跨膜转运及首过糖基化速率研究[D];南华大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978