收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

miRNA-101和miRNA-122功能研究

李帅  
【摘要】: microRNA(miRNA)是真核生物中一类长度约为22nt,由茎环结构前体加工而来的具有基因调控功能的小分子非编码RNA。miRNA通过与其靶基因mRNA的3′非翻译区(untranslated region, UTR)结合抑制靶基因翻译或导致靶基因mRNA的降解,从而在转录后水平调控真核生物的基因表达。miRNA广泛参与细胞增殖、凋亡、应激等重要生命过程的调控。大量研究表明,miRNA与多种肿瘤的发生有着极为密切的关系。 我们首先研究了miRNA异常表达与肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)发生发展之间的关系。利用miRNA芯片及本实验室建立的miRNA实时定量检测方法,我们检测了肝细胞癌组织及癌旁组织中miRNA的表达,发现miR-101、miR-148a、miR-182、miR-422b、miR-451在两种组织之间存在显著表达差异。运用生物信息学预测软件、荧光素酶报告基因实验以及Western Blot,我们发现miR-101能抑制fos癌基因的表达并抑制转录因子AP-1的活化。此外, Transwell细胞体外侵袭实验表明miR-101能够抑制fos的表达进而抑制肝癌细胞系的侵袭转移。 本研究同时关注了肝脏中特异性高表达的miR-122。为了寻找miR-122的候选靶基因,我们对miR-122的成熟体进行了生物素(Biotin)标记,并将其转染入细胞,通过亲和纯化我们富集了miR-122的靶基因。此外,我们还发现miR-122能够抑制PRKRA的表达进而促进miRNA的加工成熟。 取得的主要进展有: 1.肝细胞癌中miRNA的异常表达。利用miRNA芯片及实时定量PCR检测了20例肝细胞癌病人癌组织和癌旁组织中miRNA的表达,发现在肝细胞癌组织中miR-101、miR-148a、miR-422b、miR-451表达显著升高,而miR-182表达显著降低。 2. fos癌基因是miR-101的靶基因。荧光素酶报告基因实验证实miR-101通过作用于fos基因mRNA的3′非翻译区抑制其表达。在人胚肾细胞HEK 293中过表达miR-101可以显著抑制PMA对内源FOS蛋白的诱导表达。 3. miR-101抑制转录因子AP-1的活化并抑制肝癌细胞系的侵袭转移。利用AP-1转录活性报告载体(pAP-1-Luc),表明miR-101能够抑制fos进而抑制由PMA诱导的转录因子AP-1的活化。利用Transwell细胞体外侵袭实验,发现miR-101能够抑制fos进而抑制由肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)诱导的肝癌细胞系的侵袭转移。 4.运用实验方法寻找miR-122的候选靶基因。对miR-122成熟序列3′端进行生物素标记,将其转染入肝癌细胞系HepG2中,之后用温和方式裂解细胞并利用生物素与链亲和素之间的亲和性富集miR-122的靶基因。提取富集产物中的RNA,用实时定量PCR及基因芯片检测富集的基因,发现miR-122的多个已知靶基因得到了富集,并发现了一些新的候选靶基因。 5. miR-122能够抑制PRKRA的表达进而促进miRNA的加工成熟。结合以上基因芯片结果和miRNA靶位点预测软件的预测结果,发现PRKRA是miR-122的候选靶基因。荧光素酶报告基因实验证实,miR-122可以直接作用于PRKRA的3′非翻译区。过表达miR-122可以显著抑制HepG2细胞中PRKRA的蛋白水平及其mRNA水平。miR-122和针对PRKRA的siRNA能够促进HeLa细胞中miRNA的加工成熟。 综上,本研究揭示了肝细胞癌中异常表达的miR-101能够抑制fos癌基因的表达并抑制肝癌细胞系的侵袭转移。本研究还用亲和纯化方法寻找肝脏特异性miR-122的候选靶基因,发现miR-122可以抑制PRKRA进而促进miRNA的加工成熟。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 蒋利和;刘景根;;药物成瘾中的微RNA[J];生命的化学;2011年04期
2 闫明;于学武;;微小RNA及其作用机制的研究进展[J];现代畜牧兽医;2011年06期
3 张海华;张峰;张涛;;微RNA调节肺癌转移的分子机制[J];生命的化学;2011年04期
4 刘怀钰;;miRNA调节心脏发育的信号网络[J];安徽农业科学;2011年19期
5 张玉玲;夏银可;靳丽军;翟小伟;付祥龙;陈晓丽;麻雪刚;刘凤军;;microRNA与胎盘发育关系的研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年08期
6 钟焱;胡维新;;多发性骨髓瘤相关microRNA的研究进展[J];生命科学研究;2011年04期
7 朱文楠;习杨;吕湘;刘德培;;人类miRNA上游转录因子及下游靶基因的基因本体分析[J];中国微生态学杂志;2011年08期
8 许橙;薛文志;赵茂鑫;陈信;刘颖;于汪洋;许艳丽;马腾壑;高妍;张嘉保;袁宝;;miRNA-181b在牛腺垂体中的表达规律及其调控作用研究[J];安徽农业科学;2011年20期
9 王海鹏;高杰;张小平;樊志强;杨彤涛;范清宇;马保安;;miR-30a-5p在人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的生物学功能及验证[J];中国医药导报;2011年16期
10 李石营;于斌;姚登兵;王勇军;张占虎;顾晓松;;坐骨神经缺损后大鼠近端神经新miRNA的鉴定与功能分析[J];中国科学:生命科学;2011年07期
11 何丹;杜文婷;任思冲;刘戟;;沉默交配型信息调节因子2同源蛋白Sirt1[J];生命的化学;2011年04期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈黎;李宁;;miRNA在猪卵母细胞成熟过程中作用[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
2 王星果;郁建锋;龚道清;顾志良;;鸡脂肪组织和骨骼肌miRNA的筛选和表达研究[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
3 成海兰;姜孝成;;miRNA与水稻种子活力的相关性研究[A];第二届全国种子科学与技术学术研讨会论文摘要集[C];2011年
4 杨子学;陈宝安;;miRNA在淋巴造血和急性淋巴细胞白血病中的作用[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
5 付彦;吴徐行;杨德英;谢跃;古小彬;王淑贤;杨光友;;犬恶丝虫成虫miRNA的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
6 李霞;;MiRNA-miRNA Synergistic and Subpathway Network[A];第四届全国生物信息学与系统生物学学术大会论文集[C];2010年
7 何卓晶;洪艳;;病毒miRNA研究进展概述[A];2011年浙江省医学会医学病毒学分会、医学微生物与免疫学分会学术年会论文汇编[C];2011年
8 邹丰;刘丽江;;miRNA在肿瘤转移中的研究进展[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会摘要集[C];2011年
9 吴徐行;付彦;杨德英;谢跃;古小彬;王淑贤;杨光友;;多头带绦虫miRNA测序研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
10 刘奔;王涛;郑红;李海欣;张丽娜;陈可欣;杨达;张微;;利用miRNA芯片研究胃癌发病相关的miRNA及下游信号通路分析[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李帅;miRNA-101和miRNA-122功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
2 张忱;大鼠癫痫持续状态后海马miRNA表达谱的研究[D];中南大学;2010年
3 卢韶华;肺癌患者组织及血浆miRNA肿瘤标记物的发现及验证[D];复旦大学;2010年
4 何艳;肝细胞肝癌相关基因中miRNA结合靶点内多态的筛选及功能分析[D];苏州大学;2010年
5 夏伟;临床肿瘤标本中差异miRNA的检测及mir-200b功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
6 刘伟;SAMP8小鼠海马异常表达miRNA的鉴定和初步功能研究[D];中国协和医科大学;2009年
7 罗红春;胃癌miRNA表达谱及胃癌中显著下调的miR-9和miR-433的功能研究[D];重庆医科大学;2010年
8 茅凌翔;肠道病毒71型分子流行病学调查及miRNA抑制肠道病毒71型体外复制的研究[D];江苏大学;2011年
9 张文辉;胃远端腺癌miRNA表达谱及miR-204调控机制的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
10 阴祖军;胁迫诱导棉花microRNA的差异表达分析[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵百慧;油松胚珠游离核分裂期miRNA的克隆与初步鉴定[D];北京林业大学;2010年
2 张坤山;调控过氧化物酶体生物合成与增殖的miRNA分析与鉴定[D];南昌大学;2010年
3 黎媚媚;内含子27碱基miRNA对内皮一氧化氮合酶调控机制的研究[D];南华大学;2010年
4 尤昊;抑制miRNA-21的表达对胆管癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及其靶基因的探讨[D];安徽医科大学;2011年
5 杨文征;马铃薯保守性miRNAs的预测与验证[D];浙江理工大学;2010年
6 郑培明;白纹伊蚊miRNA的测序、鉴定及表达谱的初步分析[D];南方医科大学;2010年
7 黄宝春;内含子miRNA反馈调节其宿主基因表达和功能的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
8 罗荣;DmiR:小RNA转录组深度测序的miRNA预测[D];福建农林大学;2011年
9 薄维平;木薯耐寒相关microRNA的差异表达分析[D];海南大学;2010年
10 周鹏方;猪和甲型流感病毒microRNA预测软件系统[D];西北农林科技大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 张晔;细胞中“宅男宅女”是传递“信号”大使[N];科技日报;2010年
2 实习生 蒋洪涛 王昊魁;miRNA—21:让肿瘤对它“上瘾”[N];科技日报;2010年
3 记者 许琦敏;“全球特工”高效调控生命活动[N];文汇报;2010年
4 ;生物芯片 临床应用渐入佳境[N];健康报;2010年
5 蒋立明;建立研发基地 开发高新技术[N];绍兴日报;2009年
6 衣晓峰 陈英云;微小核苷酸:揭开心律失常和心源性猝死之谜[N];中国医药报;2010年
7 记者 常丽君;验血可比CT扫描提前28个月发现肺癌[N];科技日报;2011年
8 记者 刘海英;小核糖核酸影响糖尿病人血管修复[N];科技日报;2011年
9 记者 王丹;防治心肌梗死有新靶点[N];健康报;2011年
10 记者聂松义;疾病发生原因研究有进展[N];健康报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978